【铁螯合物引起的蛋白质特异性切断研究】高健.pdf

桔林大学火硕士学位论文*xx 铁螯合物引起的蛋白质特异性切断研究 x 专业:生物化学作者:高健指导教师:王宗睦教授

提要核酸和蛋白质等生物大分予是生命的物质基础。近年来,利用金属离子整合物对DNA,RNA等进行特异性切断的研究,已发展为揭示核酸及其复合物在溶液中某些重要结构特征的新手段。但是,将类似方法用于蛋白质的报道还较少.我们采用Rana等人的方法对来源于地衣芽孢杆菌的枯草杆菌蛋白酶Carlsberg进行了特异性切断研究。该酶一级结构及晶体结构均已知,不含CyS硫基,其活性部位含有活泼Ser221羟基,应用Polg0r方法将它转化为硫基。用双功能金属螯合剂BABE将硫基烷基化,之后用 Fe2+,H202,抗坏血酸钠于PH7,25℃下进行切断。

膨胀。十年前大约只有一百个左右的三维结构数据,到一九九三年中,增加到一千五百多个,而至一九九四年八月底竞达两千四面八十七个,新结构出现的速度已经超过每天一个13].但是,由于蛋白质分子的结构是一种热振荡结构,采用X一射线晶体衍射分析等方法得到的只是其振荡状态的一个平均值、即静态结构,与功能状态的动态结构间存在较大差别[4。如何能有效地阐明蛋白质分子结构与功能间的对应关系,如何能由结构出发设计特定功能的蛋白质分子等,已经成为影响结构生物学今后的发展并需厄待解决的实际问题.近年来,相继出现并发展了分予动力学、化学修饰.定位突变和切断研究等多种手段进行互补研究、分析。