【天冬氨酸□活性部位的氨基酸残基及C端缺失突发□的研究】陆军.pdf

吉林大学酶工程国家重点实验室摘要利用蛋白质工程中定位诱变技术,直接在含有天冬氨酸酶基因的质粒上进行定位诱变,将天冬氨酸酶的Lys126 改变成Gly126,对突变酶No研究表明,其质粒大小与 E.coliJ2一致,无天冬氨酸酶活性,且天冬氨酸酶基因正常表达,证明,Lys126是该酶的活性部位氨基酸残基,利用PCR技术,以线性E.coliJ2质粒DNA为模板,得到大小1503bp,1191bp,975bp三个天冬氨酸酶的基因片段,分别克隆到载体DNA中,转化至受体菌E.coliJRG1476 中,检测结果表明,只有转化子No具有天冬氨酸酶活性,且活性是E.

吉林大学酶工程国家重点实验室酸碱稳定性的测定热稳定性的测定 Km值、Vm值的测定结果和讨论一、结果:(一)天冬氨酸酶活性部位氨基酸残基的分析 1.定位诱变 2.转化子天冬氨酸酶活性检测 3.突变酶基因表达情况分析 4.转化子质粒检测(二)天冬氨酸酶C端缺失突变酶 1.PCR基因扩增:2.重组子的筛选 3.重组子质粒的鉴定 4.突变酶基因表达 5.突变酶的分离提纯 6.突变酶的性质分子量及等电点的测定酶分子光谱学性质酶的动力学性质比较二、讨论(一)天冬氨酸酶基因的定位诱变(二)天冬氨酸酶C端缺失突变酶参考文献

吉林大学薛工程国家重点实验室并取得了一定的结果.自Harden.于1901年发现天冬氨酸酶以来,对天冬氨酸酶的研究,进展非常缓慢,从对E.coliW的研究们来看,该酶由四个相同的、各含477个氨基酸残基的亚基组成,两对棒状亚基排列呈相互垂直的典型D2对称,对于天冬氨酸酶的活性来讲,四个亚基缺一不可.该酶分子量193000道尔顿,是别构酶,在酸性条件下为负协同效应,在碱性条件下为正协同效应.该酶对其底物有很高的专一性、并且一定浓度的Mg2计对其表现活性是必需的.