【木瓜□papayaprofeicaseⅢ的分离纯化及自我水解初步研究】朱锦桃.pdf

木服酶PnpayaProteinaseII的分离纯化及自我水解初步研究导师:王宗睦朱锦桃

提要本文以木瓜干乳为原料,经CM-Cellulose柱阶段洗脱得到Papaya proteinaseⅢ(PPAⅢ),在酸性B-丙氨酸体系中的聚丙烯酰胺电泳上为一条带,测得其分子量为26.N一未端氨基酸为I1e,在蛋白质的氨基酸组分分析上,没有发现Met,且LyB和Arg之比约为2。将所提纯的 PPAⅢ在30℃与16mMDTT保温,在pH8时,酶的活力变化最快.在30℃ pH8时PPAⅢ与16mMDTT保温发现其casein活力和BAEE活力变化并不一致。在此过程中PPAⅢ残留的BAEE活力在30小时左右有一个突跃:以 cys代替DTT,没有观察到此现象。

因这些组份的理化性质相差不大,都具有一定的活性,故给分离、提纯鉴定单一的木瓜酶带来了困难 1954年,KimmelSmith[4]首先得到了纯的papain、直到1967年,PoulShack才第一次报道发现了第三种酶:Shack称其为papaya proteinaseIl(PPAIⅢ), Shack通过CM-sephadex柱梯度层析首次得到PPAⅢ。George W.Robinson[3]于1975年以SP-sephadex(c-50)柱梯度层析得到同一种酶并进一步把研究了其理化性质。Butt1e.D.J.