【单链抗体2F3的分离纯化及定点突变对GPX抗体□结构功能的研究】张岩.pdf

目第一章前言.抗体酶的研究进展.抗体酶的结构与功能研究.单链抗体和单链抗体酶.具有GPX活性的含硒抗体酶的研究5.蛋白质的三维结构预测 6.包涵体蛋白的分离纯化.本论文的研究目的及策略第二章材料与方法.实验材料.2.实验方法.第三章结果与讨论1.三维结构的预测与突变位点的选择2.scFv(2F3)基因的鉴定3.定点突变.4.高表达菌株的筛选与scFv(2F3)及其突变体的表达5.含硒单链抗体酶ScFv及其突变体的制备与性质测定6.

吉林大学硕士毕业论文提要本文以2F3单链抗体为对象,进行了如下3方面的研究:1.通过酶切和测序鉴定了克隆有单链抗体2F3基因的表达载体pTMF,分别采用不同表达宿主菌和诱导时间筛选出最适表达条件,在此基础上对基因工程单链抗体 2F3进行表达。由于表达产物以包涵体形式存在,需要需要具体摸索其变、复性条件.本文在用Co“金属离子螯合层析初步纯化变性抗体蛋白,减小杂蛋白对复性十抚的基础上,分别尝试了尿素梯度柱复性、SKL透析复性和SKL尿素梯度柱复性三种方法,结果为SKL尿素梯度柱复性能较好地减少蛋白聚集现象,提高了复性效果。最后,采用分子筛层析纯化了单链抗体蛋白,达到电泳纯.2.

吉林大学硕士毕业论文的反应可以由抗体酶催化完成[8-12],少数抗体酶的活力已接近或超过了天然酶的活力.Fig-1酶通过降低反应的活化能增加反应速率目前制备抗体酶的常用模式是诱导产生可以稳定反应过渡态的抗体,同时,修饰半抗原或用化学法、基因工程法修饰抗体,设法使抗体的结合部位产生直接参与反应的残基或辅因了.制备抗体酶首先在于半抗原的设计。一个理想的半抗原应该尽可能的接近实际反应过渡态,同时要尽可能的与产物和底物不同,消除产物和底物对反应的抑制,最后要尽可能引入直接参与反应的活性残基.构:半抗原设计应考虑催化反应的微环境与反应机制。