【牛脑bFGF纯化多克隆抗体制备及其Westernblot改良方法的建立和临床应用】孙庆霞.pdf

首页在三年研究生学习期间,导师王维忠教授给予我殷切教诲、热情关怀和悉心指导,使我顺利地完成了本课题的实验工作,谨借此论文首页,向尊敬的导师表示我深深的谢意。

摘要本文以牛脑为原料,经硫酸铵盐析、CM-Sephadex C-50离子交换层析、肝素-Sepharose亲和层析,获得了高纯度、高活性的bFGF,经聚丙烯酰胺电泳(PAGE)、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)电泳鉴定证明其为等电点高于8的密切相关的二种组分,分子量约16KD,经人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)培养及成纤维细胞培养实验证明,其具有促进HUVEC和成纤维细胞增殖的生物活性,ED50为100pg/ml,最终纯化倍数约为300000。

特别是毛细血管丰富的恶性肿瘤,其患者血清和组织中 [0Z-1] bFGF含量显著高于正常人,故bFGF作为恶性肿瘤标志物对于一些恶性肿瘤的临床诊断和临床治疗疗效的判定 [1z] [22-24] 有关bFGF的提纯与检测,国外已有报道,1975 年美国加里佛尼亚大学医学中心Denis提纯并分析了 bFGF,于 [28] 1984年使用heparin-sepharose进行亲和层析提纯,改进了以前的提纯方法,建立了较完善、高效的提纯方法。最初有人用3T3细胞增殖实验或放射免疫分析方法检测 [30 bFGF,但因仪器条件、放射污染、试剂衰变等因素限制其使用价值。