[重组毒素MSH-PE40构建与表达]朱冬冬

【重组毒素MSH-PE40构建与表达】朱冬冬.pdf谨以此文献给我的导师徐勇忠教授。三年来徐老师在 学习和生活方面给予我殷切的教诲和热情的帮助,使 我能够顺利完成学业,在此向尊敬的导师致以深深的 谢意。摘要 根据黑色素瘤表面具有u-MSH特异性受体的原理,将a-MSH 与PE40基因重组,在大肠杆菌中表达具有对黑色素瘤导向杀伤作用 的融合蛋白。参照人MSHcDNA的序列,设计并合成了含a-MSH基 因结构的两条寡聚核苷酸链Xbal-MSH-Ndel,退火处理后,与经Xbal,Ndel双酶切的PET-17B37质粒连接,将人工合成的a-MSH基因插 入PE40基因的上游,处于T7起动子及终止子调控下,构建a-MSH -PE40的表达质粒。经杂交检测,酶切分析,和DNA序列分析后,将 重组质粒转化入E.绿脓杆菌外海素A(PEA)是绿脓存菌的1:要效病因子.白1961 年得到证实以来,对其理化性质,致病作用及发病积制,结购及功能 作了人量的研究。证明PEA的毒改是通过其特欢的结构来发挥作用 函。PEA具有识别区,过膜区与ADP核糖基转移酶活性区。各部分互 相协同,首先识别区与靶细胞上受体结合,然后过膜区及ADP核糖基 转移酶活性区发挥作用,杀伤靶细胞。去除PEA的受体结合区,剩余 结构几乎不能与任何细胞结合,也无细胞杀伤作用。另外,作为单链 毒蛋白,与放化疗及动植物毒素相比,PEA具有结构简单,分子量小,易于用基因工程方法修饰,毒性强,连接方便的特点。
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