【应用聚合□链反应技术检测肺炎支原体的研究】李春怀.pdf

目录摘要前基本原理材料和方法一.材料(一)菌种(二)标本来源(三)PCR技术所需试剂 h(四)血清学技术所需试剂(五)主要实验设备二.方法(一)MP培养基的制备(二)MP的分离培养(三)MPDNA的制备(四)人血白细胞基因组DNA的制备(五)MP、细菌和白细胞基因组DNA定量(六)咽拭子或疫液中MPDNA提取(七)PCR实验方法(八)PCR产物的检测 12(九)ELISA法检测MP抗体实验结果讨论小结致谢参考文献英文摘要.

前言肺炎支原体(MP)感染在世界范围内广泛存在,特别是温带和热带,北极也有发现。区域流行常年发生,暴发流行从秋天开始持续数月。此时期的感染率是平常的 3一5倍。MP感染不但引起肺炎,还可引起许多肺外并发症。近年来国内外研究表明,MP感染有不断增加的趋势,严重影响小儿的身心健康.MP的实验室诊断方法包括MP的分离培养、血清抗体检测及抗原检测。MP的分离培养需要外源性胆固醇及核酸前体,还需要葡萄糖等,营养要求苛刻。虽然培养特异性较好,但要求活的MP,需要2周以上的时间,另外,最大的缺点是极易污染,阳性率极低。不能及时指导临床诊断及治疗。

基本原理聚合酶链反应(PolymerasechainreactionPCR)又称基因体外扩增技术,用于扩增位于两段已知序列之间的 DNA区段(如图1所示)。人工合成两段序列互不相同的寡核苷酸引物,置待扩增的ONA于高温下解链变为单链模板.在低温条件下引物分别与目的片段两侧的两条链互补结合:然后退火引物在DNA聚合酶的作用下将单核苷酸从引物3端开始掺人,沿模板5一.3 方向延伸,合成DNA 新股。如此反复进行变性、退火、延伸这一循环。由于每-周期所产生的DNA均能成为下一次循环的模板,所以PCR产物以指数式方式增加,经过25-30次周期之后,特异DNA扩增达百万倍。