【狂犬病病毒糖蛋白基因在大肠杆菌和重级痘苗病毒中的表达】佟明华.pdf

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狂犬病病毒糖蛋白基因在大肠杆菌和 重组痘苗病毒中的表达 Expressionof RabiesVirus Glycoprotein Gene inE.摘要 本实验将狂犬病病毒糖蛋白基因cDNABglⅡ片段(1675bp),分别正向克 隆到大肠杆菌高效表达载体pET-17b和pET一17b2的T7启动于下游,构建 成表达质粒pET-17bRVgp和pET一17b2RVgp,转化大肠杆菌BL21(DE3),经 IPTG诱导,SDS一PAGE检测,分别在64kDa、54kDa、10kDa处可见对照萄没有 的、或较对照菌浓重的蛋白带。未经B一疏基乙醇处理的样品,40kDa处的蛋白 带更明显,薄层扫描显示该蛋白带占菌体总蛋白的4。Westernblot检测,该3条蛋白带均能与抗狂犬病病毒糖蛋白的单克隆抗体发生特异性反应.饰,更接近于天然结构。利用痘苗病毒载体表达外源基因生产多肽或亚单位疫 苗,其繁殖滴度高,稳定性好,使于操作,廉价,容易生产。痘苗病毒作为基因重 组活疫苗载体,不需要佐剂即可免疫动物,病毒繁殖过程中产生外源抗原,可 刺激机体产生抗体,诱导体液免疫和细胞免疫,而其它病毒载体尚无痘苗病毒 载体的这种优点。重组痘苗病毒作为活载体疫苗的可能性,已通过动物实验证 实,并得到了世界卫生组织的认可,但痘苗病毒的表达效率较低.为了提高往犬病病毒糖蛋白基因在重组痘苗病毒中的表达效率,为了研 制、开发狂犬病基因工程重组活疫苗,为进一步深入研究狂犬病病毒糖蛋白的 生物学和免疫学特性奠定基础,本实验采用痘苗病毒高效表