【用PCR技术检测结核杆菌特异的DNA序列及其临床初步应用】郭晓林.pdf

目录摘魚实验材料与方法一、细菌菌种.二、标本来源.三、引物.四、模板DNA的提取(一实验材料 1、试剂及试剂的配制试剂试剂的配制.仪器(二)DNA的提取方法五、PCR方法检测结核杆菌DNA(一实验材料 1、试剂及试剂的配制试剂试剂的配制.仪器

摘要本实验采用聚合酶链式反应即体外DNA扩增技术检测结核杆菌DNA。我们利用合成的一对引物,这对引物的顺序来自于编码人结核分枝杆菌蛋白抗原b的核酸序列,对包括人结核分枝杆菌在内的17种分枝杆菌进行测试,观察该引物的特异性:利用从标准人型结核分枝杆菌H37RV中提取的DNA定量后进行系列稀释分别做为模板检测该反应的灵敏度.另外,我们还对临床标本胸水、腹水中提取的DNA进行了检测.结果表明,本试验中从17种标准分枝杆菌细菌菌种中提取的DNA做为模板进行的扩增试验,除人型结核分枝杆菌、牛型结核分枝杆菌及卡介苗可见419bp扩增带外,其余的分枝杆菌均未见扩增带出现。

PCR扩增包括在待扩增的DNA片段两侧加两个寡聚核苷酸引物,以及变性,引物与其互补序列退火,用DINA聚合酶延长退火的引物这样一个反复进行的三步反应周期。引物同靶序列的反向链杂交并被定向,从而使得得聚合酶催化的DINA合成只能在两个引物之间进行,导致所需DINA片段数成倍增加。又由于延长引物也同引物互补并能与之结合,因此每个连续周期必定使前一周期合成的DNA加倍,结果特异性靶片段成2增长,这里的n代表周期数.利用PCR技术可以从一滴血、一根毛发,乃至一个细胞亦可以扩增出足量的DNA量供鉴定之用。由于PCR的特点决定了PCR基因扩增法具有巨大的应用前景。