【生物素标记核酸通用探针的研制】盛君.pdf
93 3录目 生物素标记CHO细胞DNA探针 生物素标记核酸通用探针 提取、克隆、鉴定及夹心杂交 CHO细胞DNA的提取 CHO细胞DNA的克隆 生物素标记DNA探针 Hela CellDNA 的 要 摘 言 一、前 二、材料与方法 果 三、结 三 1.
言 前 DNA重组技术被认为是生物科学的-次革命,核酸杂交 是DNA重组操作中不可缺少的手段。核酸杂交技术的关键是 核酸探针的制备,由于核酸探针的特有价值,使其应用的范 围越来越广。近儿年来,有关核酸杂交(Nucleicacidhyb-ridization)和核酸探针(Nucleicacidprobe)的研究取得 了很多进展,其中最重要的进展是建立了核酸夹心杂交Sand Wichnucleicacidhybridization)li)。它的优点是克服 了以往标记各种特异探针所带来的麻烦,使用一个共同标的 核酸探针(核酸通用探针),可以检查不同的病毒或细胞 DNA或RNA。
5ul 15μl 5ul 125μ1 150ul 5μL 5μl 3ul 37μt 50ul 加终浓度500ug/ml蛋白酶K,37C作用1小时.加二倍体积无水乙醇沉淀DNA,用玻璃棒挑出絮状 用70 乙醇洗沉淀2次,真空抽干或风吹干.测其0D260值,根据10D260双链DNA=50μg/ml(0D260:0D280≈1)进行计算.Hind消化CH0细胞DNA和M13mp18DNA(14u/μgml)(0μg/mt)(14u/u1)4 饱和酚提取2次.氯仿异戊醇提取2次.沉淀.重悬DNA于TE中溶解。