[免疫斑点化学发光与DNA同位素探针技术的初探]朱力

【免疫斑点化学发光与DNA同位素探针技术的初探】朱力.pdf在研究生学习期间,我的导师杨贵贞教授给予了 我殷切的教诲和悉心的指导,我愿借此机会,向我的 导师表示深深的敬意和衷心的感谢。摘 要 本文首先探讨了免疫斑点法(DIBA),认为该法具有特异性强、敏感性高、快速简便,不需特殊设备,便于推广等优点。将DIBA用于细菌的快速检测,收 到了良好的效果,其敏感度可达3×10个菌体。为了提高该法的灵敏度,又将 化学发光检测系统用于免疫斑点法的终点判定,建立了免疫班点化学发光检测 法(CL一DIBA),使其敏感度提高了5倍以上。为了从分于水平上进一步深入研 究多重耐药菌的耐药基因及其播散、转移规律,我们从国外引进一株含2”一0 一腺苷转移酶[ANT(2)]基因的重组质粒pFCT3103的克隆株,该基因为一种氨 基糖贰类抗菌素钝化酶基因。碱变性法提取了质粒pFCT31031.用,用高度特异和敏感的DNA探针来寻找和鉴定细菌的耐药基因及其播散、转 移规律,取得了较好的结果。目前已知的氨基糖贰类抗菌素钝化酶基因有许多 种,2”一0一腺苷转移酶[ANT(2)]基因为其中之一,Tenover等在一株引起医院 内感染的沙雷氏菌中分离了ANT(2)基因片段,并将其连接于载体质粒pBR322 上,构建了重组质粒pFCT3103.本文探讨了免疫斑点法,将化学发光系统应用于免疫斑点法,并用发光 光度计进行终点检测,以提高敏感度,增加结果判定的客观性。
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