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叶锋方士昌原位杂交检测三个新基因在大肠癌中的表达浙江大学医学院肿瘤学 97级硕士研究生:师:导

原位杂交技术及其进展(综述)摘要:原位杂交是检测和定位细胞、组织和染色体中特异性核酸序列的重要技术。作为形态学和分子生物学的完美结合产物,原位杂交技术已被认为是细胞分子生物学、遗传学和病理学等领域中极有价值的研究手段。本文概述了原位杂交的历史沿革、实验步骤以及技术改良和进展。指出结合其他先进技术和本身多种技术改良方法的相互结合,是原位杂交不断优化原位杂交(Insituhybridization,ISH)是应用特定的标记的已知的核酸探针与组织或细胞中的待测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合,形成杂交体,然后应用与标记物相应的检测系统,使杂交后的信号在原有的位 ISH技术是以H

已取得许多进展i31。Padlock探针是寡核苷酸,它能依靠核酸的靶点识别进行粘合成环状,从而被它们的靶局部捕获。因此,这些探针可提供特异性检测和低背景。它可检测着丝粒重复序列的单基因误配(14].根据标记物不同,探针又可分为同位素类和非同位素类。前者主要包括H、35S、32P、14C、I25I等标记探针。尽管近年来非同位素标记ISH 的兴起,但由于放射自显影检测技术具有敏感性高,易于定量分析等优点,同位素标记探针ISH仍在一些领域被认为是“金标准”。非同位素标记物主要有生物素(Biotin)、荧光素(Fluorescein)、地高辛(Digoxigenin)等。