【之人GOR基因重组体的构建及其在COS-7细胞内的表达】.pdf

目中文摘要英文摘要论文前言材料与方法结果.讨论结论参考文献.综述致谢.

一Cos-7细胞棕,然后:从核酸水平上分析、确定重组体是否已转染入细胞和重组体是否已在细胞内转录。从蛋白质水平上分析、明确重组体是 GOR融合蛋白。制备人源性GOR蛋白粗制品。(一)人GOR基因真核重组体的构建:1.人GOR基因片段的获取:用域裂解法小量制备人GOR基因原核重组体 DNA,然后用限制性内切酶一EcoRI酶切切下人GOR基因片段,用挖槽法从 4 琼脂糖中回收人GOR基因片段,关用酚氯仿抽提纯化,最后溶于高温灭菌的 20ul双蒸水中.2.真核表达载体的制备:为了保存质粒菌种,首完分别将真核载体一一 pcDNA3.

Cos-7细胞的GOR基因转录成mRNA的量少或不转录,或引物区基因序列与人 GOR基因不同。而转染的细胞都可见约144bp的性条带,表明重距体已转染入 Cos-7细胞,而且重组体A、B、C都能在细胞内转录.用TnizolReagent抽提获取的蛋白质,用免疫联吸附法检,以判断真核载体pcDNA3/Myc-HisA、B、C三个质粒中哪个质粒构建的重组体正确表达了人GOR蛋白。用抽提的蛋白质包被酸标板,根据文报道70 HCV患者抗 GOR抗体阳性,一抗使采用5份混合HCVRNA阳性的患者血清:为了提高检测的敏感性,二抗采用生物素化的羊抗人抗体和亲和素标记的辣根过氧化,用联苯二