[环境水体指示菌的PCR检测研究]

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6 1 -7 7 -7 -8 -8 8 目录 9.非靶DNA存在下对目的DNA扩增的影响 摘要 英文摘要-前言 材料与方法 一材料 1.细菌菌株 2.水样标本 3.引物合成 4.DNA扩增仪 二.方法 1.细菌DNA的提取 2.水样标本DNA的提取-3.DNA紫外分光光度计测定 4.细菌菌液平板计数-5.引物配制-6.PCR扩增 7.PCR反应条件的优化 8.PCR扩增产物的检测 结果 一.摘要 本文研究了用聚合酶链反应(polymerasechainreaction)快速检测 水体指示菌一大肠菌群(Totalcoliform)和大肠杆菌(Escherichiacoli)的实验方法。采用的两对引物分别针对编码大肠菌群β-半乳糖苷 酶(β-gluctosidase)的LacZ基因和大肠杆菌β-葡糖醛酸酶(β-glucuronidase,GUD)的UidA基因。实验结果表明,这两对引物分别 能扩增LacZ基因的264bp和UidA基因的147bpDNA片段。18,9 4.[10,11] 而 前言 大肠菌群(Totalcoliform)是一大类革兰氏阴性小杆菌。它包括 人与哺乳类动物肠道中的正常寄生菌和肠道病原菌,以及土壤和 水中的腐生菌和少量植物病原菌。它们能以好氧或兼性厌氧方式 长期以来,大肠菌群和大肠杆菌一直作为水体指示菌受到环保 部门的监控,对它们在水体中存在状况的检测可以基本了解水体 的细菌污染情况。其中大肠杆菌由于与水体的人畜粪便污染密切 普遍采用的常规水体指示菌检测方法是多管发酵法(MTF法)和滤 膜法(MF法)。