【大麦黄花叶病毒中国株系cpNIa和5end基因的克隆和5end在大肠杆菌中的表达】.pdf
8 8浙江大学生命科学学院硕士学位论文 目录 pUC-5end和pGEMEX-1大量提取及纯化 cDNA合成和3个基因的PCR扩增.cDNA的合成 3个基因的PCR扩增 克隆质粒的大量提取和纯化 克隆质粒的前处理.基因片段的前处理 重组质粒的构建 重组质粒的转化.重组质粒的检测 5end的TA克降.目的片段的纯化回收 2重组表达质粒的构建 2重组表达质粒的检测重组蛋白的SDS-PAGE检测 要 摘 前 言 材料和方法 1.材料.方法 2 2 2 2.
浙江大学生命科学学院硕士学位论文 大麦黄花叶病毒中国株系cp、NIa和5cnd基因的 克隆和5cnd在大肠杆菌中的表达 摘要 利用RT-PCR技术和TA克隆技术克隆了大麦黄花叶病毒中国株 系(BaYMV-C)的cp、NIa和5end等3个基因。序列分析结果表明 它们与BaYMV的日本和欧洲株系有较高的同源性。根据基因序列进 行了基因的限制性酶切位点和阅读框分析,根据分析结果将5end克 隆到原核表达质粒pGEMEX-1,构建了重组表达质粒pGEMEX-5end,在大肠杆菌JM109(DE3)中用1mmol/L异丙基硫代半乳糖 什(IPTG)诱导进行了融合表达。
An 5 CP NIb ProteinI(270or256kD) Nla-Nla- VPgPro 浙江大学生命科学学院硕士学位论文 阅读框(ORF),它们的RNA1分别编码270kD和256kD的多聚蛋 白I,这两个多聚蛋白与Potyviruses多聚蛋白的C端大片段(包括 CI、NIa、NIb、CP蛋白)有着极大的机I似性。RNA2编码98kD的 多聚蛋白II。根据这两种病毒与Potyviruses多聚蛋白的蛋白酶酶切 位点和保守序列的比较表明:BaYMV和BaMMV的两个基因组具有 7KD14KD 图1BaYMV和BaMMV的基因图谱 多聚蛋白I经翻译后加工产生CI、NIa-VPg、N