【产气肠杆菌α-乙□乳酸脱羧□基因在大肠杆菌中的克隆和表达】.pdf

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单位代码:10335 研究生学号:M96012 产气肠杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶基因在大肠杆 菌中的克隆和表达 论文答辩日期:二九九九年六月二十五日 Lm] 答辩委员会主席:梅手和浙大玉泉校豆 副放授 论文评阅人:岑沛素斯大化工学定 叔援(姓名、职称、单位) 周雪平浙伏华他校通生物i 叔援.重组质粒的碱法提取2 通过SepharoseCL-2B过柱纯化DNA 2 质粒的酶切鉴定 ALDC基因的序列测定2 测序反应.2 电泳 2 结果与分析2 产气肠杆菌染色体DNA的提取2 ALDC基因的PCR扩增 扩增产物的连接转化和重组质粒的分析2 重组质粒的PCR鉴定 2 ALDC基因的序列分析 第三章 ALDC基因的表达及酶活检测,3技术路线 3材料摘要 啤酒中双乙酰的含量若超过0mg/L,就会产生类似饭的味 道,α-乙酰乳酸脱羧酶能直接催化α-乙酰乳酸脱羧生成乙偶姻(2-羟 一3一丁酮)而不经过形成双乙酰的过程,因此可加速啤酒的风味成 熟,缩短发酵周期,提高经济效益.本实验以产气肠杆菌染色体DNA为模板,采用PCR技术克隆 了ALDC基因,得到阳性克隆pALG3和pALG4,经酶切验证与预 期结果相同,序列测定也与已知序列一致。pALG3经BamHI和 HindImI酶切后,定向插入到原核高效表达载体pQE一30中,通过 酶切验证和直接测酶活相结合的方法筛选得到了二个重组阳性克隆 pALQ3和pALQ5。