【重组人肿瘤坏死因子-βrhTNF-β的纯化及细胞素毒效应研究】.pdf

杭州西子味精厂国内对TN阶已进行了定的工作。主要是对基因党隆和物理图谱作了 H 我们实马验室已有能表运人TNFB和人TMFB/INFr的工程菌,并进行了大号的分离纯化工作。位结果明,由于原来所建的重红质在现有的工程菌中表然水手不高,这给分离纯化工作带来很火的困难,最碍了下放工程的坐行。因此,我们拟着手将已有m目的基因TNF3重丝于高效表达质粒(PJLAS03),希望能获得高效衰这 TNF的菌株,和大批<重红TFB产物,以研秀其生物功能。

杭州西子味精厂二.实验议计:细芦培养物的生号(即质粒的扩增) 细芦裂解:分离,纯化质粒 A:获取的基因 B获取载伟质粒 HintI,xbaI双融酶tppsk SphI单酶切个电3永除、IFNr片取 3端去除反应业 EcoRI西每切个 ECoRIm每切 agarose电泳回收的基因接由重红转化E.coliDH5a无受态细胞鉴定抗性菌落是否重红重红子焉日表这男的淀业重红子卷白生物话性的检约广址:杭州市三学直拨:551194 电话:余二006

杭州西子味精厂 4.CaC法制备新鲜的E.col感受态细胞.用此方弦制备的天受态细胞可体每明超螺旋质粒DMA宁生5x1-2x10个转化古落,足以满足所有在质粒中幽行常规光隆的需要。该法快速,重性奴、完全适用于大多数正.c小芦株.S.转化苦落的鉴定挑取转化的单苦落,进行小规模培养,采用前述的元法分离质粒立DNA,然后用限制酶进行消化.遍过琼脂断电泳分析,以判断是否管纶 6.