【小鼠艾氏腹水癌细胞的快速冻存技术的建立】.pdf

目录摘要前言冻存液与洗脱方法的筛选(一)材料与方法(二)实验结果回讨论酒小紫快速冻存艾氏腹水癌细胞后功能和超微结构的变化(一材料与方法(二)实验结果三讨论参考文献英文摘要图版致谢附录

前言自从Polge和Smith[1]1949年首先发现在含有甘油的培养液内冻存精子获得成功以后,许多实验室在冻存液内加入各种低温保护剂,以慢速降温的方法,可以长期冻存各种细胞。但是这种慢速降温冻存技术设备复杂,操作时间很长,并且无法解决细胞内或细胞外液结冰而带来的各种损伤作用。1985年,Ra11和Fahy[2]采用高浓度的混合低温保护剂,以极快的速率降温使小鼠胚胎玻璃化冻存获得成功。这种方法不但避免了常规冻存法难以克服的细胞冷冻损伤作用,而且不需降温装置,操作时间短。

DMSO+NCS系列浓度系列为:50 ,45 ,40 ,35 ,30 ,25 V/V的DMS0加 40 V/VNCS,分为不冻存的对照组与冻存组各6组.6丙二醇(PG)+NCS系列浓度系列和分组与DMSO+NCS系列相同.先将各组冻存液内的保护剂用RPMI-1640液配制成最终浓度的110 含量,然后在冷冻前的预平衡操作中,加入BAC悬液后,各组的低温保护剂达到上述的最终浓度.3.冷冻前的预平衡,冻融和冻存液的洗脱冷冻前的预平衡按Ra1l和Fahy的方法[2],第一步,各组EAC细胞原液在室温(20°C士5°0中先滴加110 VM,使之达到各组最终浓度的 1/4浓度,平