【外源基因导入部分□解的大麦愈伤组织及转基因植株的再生】.pdf

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目录 摘要 前言 材料和方法 一、愈伤组织的诱导 I、幼穗培养 Ⅱ、花药培养 重、幼胚培养 二、愈伤组织部分酶解 三、用于基因转化的质粒DNA的制备 I、碱变性法制备 Ⅱ、CgC1密度梯度超离心法纯化质粒DNA 四、质粒pBI121DNA导入部分酶解愈伤组织 I、PEG法 Ⅱ、电击法 Ⅲ、PEG+电击法 五、转化后愈伤组织的培养、筛选、植株再生 六、GUS基因表达产物的检测 七、NPT-I斑点放射自显影检测 八、Southern Blot分子杂交 I、大麦愈伤组织总DNA的提取 Ⅱ、探针制备 Ⅲ、分子杂交与放射自显影摘要 本文以大麦幼穗、花药和幼胚作为外植体进行愈伤组织诱导,挑选胚性愈伤组织进行部分酶解处理,使细胞部分脱壁后,进行以 下转化试验:PEG法:将部分酶解后的愈伤组织在溶于F溶液的 40 PEG和20ugpBI121DNA(含NPT-I和GUS基因)中温育30分钟:电击法:把部分酶解愈伤组织在含20μgpBI121DNA的W8电击 级冲液中进行200V-1000V的电击法转化。PEG+电击法:PEG转化 处理后再用400V电击法加以转化.通过GUS组织化学检测、NPT-I斑点放射自显影检测以及 SouthernBlot分子杂交证明了:GUS.改良作物创造新品种作为战略目标已经走向应用,并预示这一高技 术在未来的作物遗传改良上显示巨大的经济效益.植物遗传转化技术是植物基因工促中十分重要的一个方面。目 前,最为常用的有农杆菌法(30,81)、PEG法(82,38)、电击法(a4 -88)和基因枪法(87,88)等。运用农杆菌法目前已在烟草、胶烟草、萝卜、紫花首、马玲薯、蕃茄、向日葵、黄瓜、油菜等几十种 双子叶植物中获得成功(B)。用PBG法,电击法得到的转基因植物有 枪法人们已经得到了烟草、大豆、玉米、木瓜等转基 因植株.大麦的遗传转化始于1987年,Junker,B.