【人γ干扰素β肿瘤坏死因子γTNFβ重组杂合蛋白对K562细胞株的细胞毒效应及其杀伤机理的探讨】.pdf

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目 论文 中文摘要 英文摘要 一.前言 二.材料和方法(一)材料(二)方法 1．TNFB的纯化研究 2.集落形成接种细胞最适数量的试验 3.集落形成法药敏试验 4H-TdR法药敏试验 5.K562细胞DNA的琼脂糖电泳 6.扫描电镜和透射电镜样品处理与观察 三.结果 1.YTNFB的分离与纯化 2.集落形成接种细胞最适数量的研究 3.不同剂量的HuIFNY、HuTNFB、IFNY+TNFB以及YTNFB对Ks62集落 形成的抑制 4.不同剂量的HuIFN、HuTNFB、IFN+TNFB以及TNFB对Ks62 3H-TdR掺入的抑制 5.前 言 干扰素(InterferenIFN)是1957年由Isaacs和Lindenman发现的具有抗病 毒、抗肿瘤和免疫调节作用的多功能蛋白质因子1-3r,可分为α、β、三 大类,其中IFNY由淋巴细胞产生,它的抗癌效应和免疫调节功能比IFNα、B 都强(4、5),是目前较广范应用的抗肿瘤生物治疗的药物之一。肿瘤坏死因 子(TumorNecrosisFactorTNF)是免疫系统的细胞分泌的一族在结构上、功能上十分相似的细胞因子。主要可分为两类:即TNFa和TNFB。TNFa、β 虽然其细胞来源不同,但其氨基酸组成有30 是同源的。故两者在生物学功 能上具有共同特征！4小时以后加入诱导剂IAA(终浓度为20ug/m1),继续于37C振荡培养6-8 小时左右,待菌体生长达到A55o=1左右时,在4C下以5000rpm离心10分钟,用0MPB(pH7)洗两次,收集菌体,保存于-20C备用.纯化 a)取1-2gE.coliHB101菌糜,加10m1PB(pH7),冰浴下磁拌 均匀使成单细胞悬液,加入PMSF(100mM)501混匀,超声波破碎菌体,至镜检 无完整菌体。4℃下,1000g离心15分钟,弃沉淀,取上清。