【快速冻存对骨髓细胞功能及造血重建的影响】.pdf

摘一要本文采用快速和慢速降温的两种不同方法,深低温保存人与敏小鼠的骨髓细胞。快速冻存组:骨髓细胞悬浮于含有10 DMSO(二甲基亚矾)和20 小牛血清的RPM11640液中,先以1C/min 的降温速率降至一50℃,再次3℃/min降至一90℃,然后投入液氮(一196C)冻存.快速冻存组:冻存液为含有18 DMS0、14 乙酰胺、9 丙二醇、4 聚乙二醇(MW6)的RP-M11640液,与骨髓细胞混合后,直接投入液氮保存.在冻存1、10、20和30天,40℃水浴快速复温,检测骨髓细胞的功能、超微结构和造血重建能力的变化。

前言自从Rall和Fahy采用玻璃化溶液快速冻存小鼠8个细胞胚胎获得成功以来！。该技术已被广泛应用于多种生物材料的低温保存[2,1]。玻璃化溶液由于含有高浓度的低温保护剂,因此对细胞具有一定的毒性作用”,但与常规的慢速冻存方法比较,快相变温度区?.细胞平衡于低温保存液中的时间较短,减轻低温胞的潜在损害作用,而且操作简便18]等。因此,在生物材料的低温保存中,快速冻存方法要比常规慢速冻存方法更有应用前途的技术之一,近年来发展迅速[i]。Takabashi]采用玻璃化溶液快速冻存人外周血单核细胞,30天的细胞回收率达91 ,膜完整性为94.

000)的RPM11640液。冻存前按Rall和Fahy的方法,分三步进行冻存前预平衡,使之达到100 的终浓度,然后分装入耐低温冷冻管内,每管0m1,样品直接投入液氮(一196℃)冻存.2慢速冻存冻存液为含有20 DMSO,40 小牛血清的 RPM11640液,与骨髓细胞悬液等量混合,按郑斯涌等17方法监 90℃,平衡10分钟后,投入液氮冻存.2复温快速和慢速冻存的骨髓细胞样品,在冻后1、10、20和30天,40C水浴快速复温,分别用1M和0M的蔗糖液作缓慢梯度稀释,离心洗脱冻存液[5.,重新悬浮于RPM11640液中.3.检测指标 3.