【大麦和水稻基因枪法转基因初探】.pdf

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大麦和水稻基因枪法转基因初探 目录/三、金粉的准备和DNA的包裹 四、PDS-1000/He型基因枪的操作步骤 五、PDS-1000/He型基因枪操作参数的选择 六、GUS的组织化学法检测 九、卡那霉素抗性愈伤组织的筛选 二、水稻悬浮细胞的绿色荧光蛋白(GFP)基因的瞬间表达 三、大麦小孢子的预处理及GUS基因的瞬间表达 四、大麦幼胚的预培养及GUS基因的瞬间表达 五、大麦幼胚的超低温保存及植株再生 六、卡那毒素抗性愈伤组织的筛选 一、受体材料的选择及其培养条件 二、GUS和GFP报告基因的瞬间表达及检测 三、基因枪操作参数的优化 四、大麦幼胚的超低温保存 五、卡那毒素选择性培养基上的筛选前言 遗传转化是植物基因工程中重要的研究领域之一.近年来,未谷类作物的转 化技术取得了很快的进展。目前,能实现成功转化的技术主要包括农杆菌介导 法、PEG法、电激法、基因枪法、微注射法、脂质体介导法等等,农杆菌介导 法已成为转化双子叶植物较为成熟、常规的方法,具有简单、快速、高效的特点 但是农杆菌的宿主范围仅限于双子叶植物和极少数的单子叶植物,绝大多数的单 子叶植物普遍存在着对农杆菌感染的天然抗性,即使某种条件下克服了这种抗 性,依然存在着转化效率低、寄主专一性等问题,限制了该技术在未谷类作物中 的应用.预培养保护剂:CC基本培养基+30g/L蔗糖+0M山梨醇,pH5 将大麦幼胚置于预培养保护剂中,摇床上振荡培养2天,25℃.冰冻保护剂:CC基本培养基+30g/L蔗糖+0M山梨醇+10 DMSO,pH5 将经过预培养的幼胚,置于预冷的冰冻保护剂中冰浴30分钟,将冷冻管直 培养基1:CC基本培养基+水解酪蛋白1g/L+L-腩蛋白500mg/L+VB5mg/L+培养基2:琼脂为8g/L+可溶性淀粉20g/L,其余同培养基1 快速化冻法:从液氮中取出的冷冻管直接放人37C水浴中,化冻后将幼胚 放置在无菌的滤纸上,吸干幼胚四周的冰冻保护剂,然后将幼胚分别接于上述四 将水稻悬浮细胞接