【传染性法氏囊病病毒AJ株和Cu1株VP2保护性抗原cDNA的克隆】.pdf
单位代码:研究生学号:M9377 传染性法氏囊病病毒AJ株和Cul 株VP2保护性抗原cDNA的克隆 论文答辩日期:一九九六年月五月 答辩委员会主席:(姓名、职称、单位)了仁瑞教授税州大学生命科学子院 论文评阅人:(姓名、职称、单位)宋智勇主任函师 浙江省工生防疫站 張耀州副教授 浙江农大生化所
摘要 传染性法氏囊病病毒(IBDV)的宿主保护性抗原表位主要集 中在结构蛋白VP2的可变区中。本研究分别克隆了IBDV国内分离 野毒AJ株和欧州经典弱毒Cu1株的可变区保护性抗原基因.病毒样品经蔗糖梯度离心纯化后,以蛋白酶K,酚、氯仿提取 其基因组dsRNA,先以随机引物反转录(RT)合成cDNA,然后用 特异引物(primerI、ⅡI)通过聚合酶链式反应(PCR)扩增得 到预计大小的cDNA片段(1kb)。目的cDNA片段经低溶点胶纯 化回收,以HindIl、BglⅡI消化,将其插入到pUC19多克隆位点 HindⅢ和BamHI之间,并转化到大肠杆菌JM109中,筛选出二个 重组子克隆
(一)感受态细胞制备(二)转化 八、限制酶切鉴定,九、重组质粒PCR鉴定结果与分析,一、IBDV分离鉴定二、IBDV基因组dsRNA的提取三、IBDVVP2抗原基因cDNA的合成及扩增 四、VP2抗原基因cDNA的克隆及鉴定1、克隆策略分析2、少量提取质粒电泳检测 3、重组质粒的酶切鉴定 4、重组质粒PCR鉴定 讨论参考文献英文摘要.附录1、2.