【蚕豆叶绿体DNABamHI克隆库的构建及含16S-23SrRNA基因克隆的分析】.pdf

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蚕豆叶绿体DNABamHI克隆库的 构建及含(6S-23SrRNA基因克隆的分析 摘要 高等植物的叶绿体 DNA(ct DNA)按有无逆转 重复顺序可分为二类:一类为含有逆转重复顺 序的,如油菜CtDNA等;另一类为不含有逆转 重复顺序的,如蚕豆Ct DNA等。研究这二类 CtDNA在结构和功能上的差异以及二者在进化 中的关系是非常有意义的。我们以pBR322为载 体,E.CoLiHB1o1为受体菌,采用鸟枪法构建了 蚕豆ctDNABamHI克隆库,并从库中分离得到 含叶绿体rRNA基因的克隆和含RuBPcase LS基因 的克隆。引言 叶绿体是绿色植物进行光能转化的细胞器; 具有遗传自主性,其基因组较小,结构与遗传 组成简单。叶绿体DNA(以下简称CtDNA)是高度 重复的分子,一般有许多拷贝(60～lc0 DNA分子/叶 [2] 绿体)。故自从年Ct DNA被发现后,叶绿体基 因组一直是研究的中心课题,但只有在近来有 效地应用了重组DNA技术后,才取得长足进展.大多数高等植物的叶绿体基因组是环状双 链的DNA分子,其大小根据种类的不同,从120 b到18okb不等.此环状分子可被分成四夕区:L3J 二个逆转重复区及分别把这二个区分开的一个 大单拷贝区和一个小单拷贝区。23SrRNA基因间隔顺序、部分23SrRNA基因的重组 质粒做了物理图谱,并进行了电镜观察分析.材料和方法 一、Ct DNA的制备 本实验所用蚕豆种子(Viciafaba启新1号)由 启东农科所提供。Ct DNA的提取按KentonKo等 的方法,加以修改。取蚕豆嫩叶150.200克,洗 净,擦干,去中脉,加液氮在夕浆器中打碎,复温至一5℃时,加入9m0预冷的提取缓中液A(a3M甘露醇,10mMTr心pH8;5omMEDTA,5mM2一硫 基乙醇,1 BSA,充分悬浮,4下静置1 小时,匀浆通过二层砂布、一层龙布过滤.滤液于4°c4.