【长期冻存人外周血淋巴细胞的细胞膜形态和功能及染色体的变化及其损伤机理初探】.pdf
目 病要 前言 材料与方法 结 讨论 参考文献 英文摘要 附录:低温处理对人外周血淋巴细胞染色体影响 鸣谢
前言 自从Po1ge和Sm1th首次发现精子在含有甘油的 培养液内可以经受低温而不死亡。Ashwood-Smith于1964 年报道了采用Me2S0作为低温保护剂,冻存小鼠淋巴细 胞获得成功。此后,随着临床与科研的需要,低温保存各种生物 材料日益受到重视.选今,虽已有许多运用低温技术保存各种细胞获得成功的例 子,但这些方法未能进一步扩展到更多和更复杂的生物体系中去 其主要原因是对低温损伤机制和生物材料在降温与复温过程中的 变化规律尚缺乏深刻的了解 已经提出的有关低温损伤机理的假说很多。例如MaZr提 过程中,均有其最佳冷却速率。
材料与方法 一、淋巴细胞的分离 由杭州市中心血站提供的健康青年人O型ACD抗凝的外周血 制成的白膜层,按徐婉燕等改进的密度梯度离心法。获得淋 巴细胞.二、实验分组 将分离得到的同一供血者淋巴细胞。分成七组,分别悬浮在 下述各种溶液内,然后分装在耐低温塑料管内,每支1m0,内 含5X10‘个细胞。对照组不加低温保护剂,也不进行冻存处理.室温处理的各组,放置在22土5℃1小时。再进行各项检测。冻 存各组。在冰水浴内平衡40分钟后,按郑斯涌等的方法监测 降温速度,以每分钟降温1C的速率,降至一80C后,立即投入 液氮内保存,并在冻后10、20、40天和三个月后,把样品在 37°℃水浴