[轮状病毒细胞培养条件的研究]

【轮状病毒细胞培养条件的研究】.pdf轮状病毒细胞培养条件的研究 浙江医科大学微生物教研室 研究生:蔡挺 导师:朱圣禾 人轮状病毒(HRV)的体外培养有一定困难,迄今尚无轮状 病毒细胞培养条件系统研究的报道。本文用正交设计的方法研究了 胰蛋白酶、外源性凝集素、病毒在细胞的吸附时间和培养方式等因 素对HRV在MA一104细胞中增殖滴度的影响,同时还观察了病 毒的接种滴度和培养时间对猴轮状病毒(SRV)增殖滴度的影响 以筛选较佳的细胞培养条件,获得较高滴度的轮状病毒收获物.一、胰蛋白酶等因素对HRV增殖的影响 病毒的浓度和时间.MA一104细胞感染病毒前是否经PHA,放 线菌素D(ActD)预处理及HanKs液洗涤.的收获滴度。可能因轧状病感染增殖。使细胞内源性水解 酶释放而分解破坏病毒的核酸和蛋白,因此,在轮状病毒细胞 培养时必须掌握收获时间.实验结果表明按下列条件在MA一104细胞上培养HRV,可获得较高病毒滴度,即病毒接种前经胰蛋白酶(Difco.5或10ug/m1)和ConA(50ug/m1)处理60分钟,接种至经PHA(100ug/m1)预处理1小时和HanKs 液洗涤3次的MA一104细胞。37°C吸附30分钟.加含 有Iug/m1AetD和1ug/m1胰蛋白酶的维持液.37C 旋转培养(12转/小时)。此外应注意病毒接种量和掌握培 养时间。一旦CPE达到3+或有50.the supermatants were dotectod by Rota-ELISA.Thc results showed thatHRVyields wcre sigmificantly incroased in thefollowing con- ditions 1)HRV were traated with trypsin(5 orug/ml) at 37°c formin。baforc inoculation(P
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