【制备抗人血红蛋白单克隆抗体检测潜血的研究】.pdf

剩备抗人血红蛋白单克隆抗体检测肠通类潜血的研究浙江医科大学肿瘤免疫专业研究生导师郑树张正整摘要抗人Hb单克隆抗体自NS1骨髓瘤细胞与提纯的人Hb免疫的BALB/C小鼠牌脏细胞融克隆及持续传代培养,分泌抗体性能稳定。腹水效价可达1:65536。此单克隆抗体对人Hb具有良好的专一性,不与其它动物H及人血清发生交叉反应。琼脂双扩散法证明属IgG1亚类,经免疫电泳和SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳检测杂交瘤细胞分泌的抗体分子均一。用一株细胞分泌的单克隆抗体致敏羊血球,检测人Hb不发生凝集反应。

5.抗体检测.间接血凝法(PHA):融合后第十天,挑选有杂交瘤细胞生长孔用PHA检测抗体.V型血凝板首先加入含1 兔血清的pH7,0MPBS50μ1,然后加入待检上清501 周时作阳性对照(提纯羊抗人Hb抗体或鼠免疫血清):阴性对照(正常BALBC鼠血清及E 常培养基)、空白对照。最后各孔加1Hb致敏血球50μl,振荡1分钟,V型板置37℃ 1小时,观察结果。以红细胞集中于孔底为不凝集,均匀铺散于孔周边为凝集,将次类推,以抗体稀释倍数为1:2出现凝集反应(以上)判断为阳性级致敏血琼洗涤RBC:无菌抽取绵羊颈静脉血20ml与50mtAlsever保存液混匀,离心

2.细胞融合及初筛结果:共融合六次,其中用NS1细胞融合三次,第一次融合成功、第二次污染,第三次)细胞全部死亡。FO细胞融合三次均成功、融合前后细胞形态对比,融合前,NS1细胞圆、周边透亮,大小均等,融合后第一天细胞形态好,视野中活细胞数量多,融合后第二至三天非骨髓瘤细胞-牌细胞融合细胞开始死亡,第五至七天非杂交细胞全部死亡,杂交瘤细胞克隆初步形成,至第十五天已长至孔底110(见图7-12)FO融合细胞较NS1细胞生长快,切形态较后者稳定。