[制备抗人血红蛋白单克隆抗体检测潜血的研究]

【制备抗人血红蛋白单克隆抗体检测潜血的研究】.pdf剩备抗人血红蛋白单克隆抗体检测肠通类潜血的研究 浙江医科大学肿瘤免疫专业 研究生 导师 郑树 张正整 摘要 抗人Hb单克隆抗体自NS1骨髓瘤细胞与提纯的人Hb免疫的BALB/C小鼠牌脏细胞融 克隆及持续传代培养,分泌抗体性能稳定。腹水效价可达1:65536。此单克隆抗体对 人Hb具有良好的专一性,不与其它动物H及人血清发生交叉反应。琼脂双扩散法证 明属IgG1亚类,经免疫电泳和SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳检测杂交瘤细胞分泌的抗体 分子均一。用一株细胞分泌的单克隆抗体致敏羊血球,检测人Hb不发生凝集反应。5.抗体检测.间接血凝法(PHA):融合后第十天,挑选有杂交瘤细胞生长孔用PHA检测抗体.V型 血凝板首先加入含1 兔血清的pH7,0MPBS50μ1,然后加入待检上清501 周时作阳性对照(提纯羊抗人Hb抗体或鼠免疫血清):阴性对照(正常BALBC鼠血清及E 常培养基)、空白对照。最后各孔加1Hb致敏血球50μl,振荡1分钟,V型板置37℃ 1小时,观察结果。以红细胞集中于孔底为不凝集,均匀铺散于孔周边为凝集,将 次类推,以抗体稀释倍数为1:2出现凝集反应(以上)判断为阳性级 致敏血琼 洗涤RBC:无菌抽取绵羊颈静脉血20ml与50mtAlsever保存液混匀,离心2.细胞融合及初筛结果:共融合六次,其中用NS1细胞融合三次,第一次融合成功、第二次污染,第三次)细胞全部死亡。FO细胞融合三次均成功、融合前后细胞形态对比,融合前,NS1细 胞圆、周边透亮,大小均等,融合后第一天细胞形态好,视野中活细胞数量多,融 合后第二至三天非骨髓瘤细胞-牌细胞融合细胞开始死亡,第五至七天非杂交细 胞全部死亡,杂交瘤细胞克隆初步形成,至第十五天已长至孔底110(见图7-12)FO融合细胞较NS1细胞生长快,切形态较后者稳定。
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