【使人精子制动的抗人精浆蛋白单克隆抗体的制备及其特性的研究】.pdf

录一、中文摘要二、英文摘要三、论文正文 1、前言 2、材料与方法 3、结果 4、讨论 5、小结 6、致谢 7、参考文献 -43 四、综述(一) -49 五、综述(二) -66

分离心15分钟,取上层清液,Fo1in一酚试剂法测定蛋白质浓度后,用生理盐水调整精浆蛋白质浓度为2mg/m1,与等量福氏完全佐剂充分乳化,取1m1乳剂沿BALB/C小鼠背部、颈下及腹股沟等处皮下多点注射。2周后注射加福氏不完全佐剂乳化的精浆蛋白一次,以后每隔10天,连续2次于腹腔注射用生理盐水稀释的精浆。经四次基础免疫后,每隔4天,连续2次腹腔注射,7天后,融合前4天加强注射一次,取免疫小鼠脾细胞1,5× 108个与NS一1细胞3×107个混合(5:1),用50 6 PEG4000作为细胞融合剂使两种细胞融合。

McAb可使精子的顶体后区和颈部染以强烈的荧光,C12 McAb与NS一1腹水(阴性对照)一样,均不能使精子表面染以任何荧光而呈暗绿色。以上结果表明,D1McAb识别的精浆特异性抗原是精子外套抗原,能结合到精子的顶体后区和颈部表面,与精子的运动等生理功能有关.取离体后2小时内的精浆上SephadexG一100柱(2X100cm),用0MHAC-NaAC(PH 5)缓冲液洗脱,得到3个互相重叠的蛋白分离峰。分别取这 3个峰峰顶部收集管的蛋白溶液与McAb作ELISA试验。