【多聚□链反应检测体原体DNA方法的研究】.pdf

目论文多聚酶链反应检测衣原体DNA方法的研究中文摘要英文摘要.正文引言材料和方法一、毒株与细胞二、DNA提取三、引物和寡核苷酸探针四、PCR扩增五、琼脂糖凝胶电泳检测六、DNA斑点杂交检测七、PCR样品的快速制备结果一、PCR扩增—电泳检测的特异性与敏感性研究二、PCR扩增—DNA斑点杂交的特异性与敏感性研究三、衣原体DNA的PCR快速检测法研究讨论参考文献综述沙眼衣原体外膜主蛋白研究进展综述二多聚酶链反应检测沙眼衣原体方法及应用.

衣原体属特异性的引物对及探针寡核苷酸片段(中科院上海细胞生物研究所合成)。引物对在16SrRNA基因中的位点分别为 832.851及1041～1022(各20mer)因此目的扩增片段长210bp。30mer探针片段的位点为909～ 938,与扩增片段的中间序列互补.从待扩增样品提取DNA,改进PCR反应条件,考核引物和 PCR扩增的特异性以及敏感性。DNA的提取按常规方法进行,即以1 SDS和蛋白酶K处理,酚、氯仿抽提以及无水乙醇沉淀.提取的DNA以分光光度计测定浓度。PCR扩增根据Innis等方法改进。

本文的研究结果表明,所建立的PCR检测系统为衣原体属特异性。PCR扩增—电泳检测的灵敏度达到检出1个考贝的衣原体DNA分子。PCR待扩增样品经简单处理即可直接作PCR扩增。结果仅根据电泳凝胶上在210bP分子量处出现清晰的DN A扩增带便可确定。整个工作仅需6小时。在首次检测或在实际应用中发现扩增带不清楚而需确定特异性时,可用生物素化的寡核苷酸探针作DNA斑点杂交证实。本法具备高度的敏感性和特异性、且快速简便,可望成为衣原体感染诊断和分子流行病学调查的先进手段,为性传播疾病的监控和防治提供可靠的依据。