【虫萤光素□的固定化及其反应器】.pdf

致谢本论文是在导师杨歧生副教授、吉鑫松副研究员精心指导下,于上海生化所酶工程组完成的.在一年多的论文工作期间,一直得到了酶工程组袁中一研究员及其他老师的积极指导和热情帮助.在虫荧光素酶理化性质、测定方法等方面,上海植生所的王维光、顾俭本高级实验师给予了悉心的指导.在发光计使用及维修中,浙江大学生命科学研究室叶建华老师给予了大力协助.在光纤制做及使用方面,得到了东南大学电子工程系曹康敏老师的大力帮助。在此本人均表示衷心的感谢！

摘要本论文选用虫荧光素酶粗提物进行酶的固定化。比较了CNBr活化法、环氧法、重氮法和戊二醛法等固定化方法对虫荧光素酶的固定情况。认为CNBr活化Sepharose-4B后固定虫荧光素酶的方法效果最佳。获得单位酶活(750U/g)和稳定性最高Br-Sepharose固定化虫荧光素酶对底物LH2的Km为12uM,酶反应的最适pH7,最适温度25℃.为了对固定化酶进行定量比较,我们建立一套利用光纤传导的酶活测定装置及酶活定量的公式。这个测定装置可测定溶液和固定化发光酶的活性,也可用于测定ATP。并为光纤生物传感器的建立提供了参考。

论文:虫荧光素酶的固定化引言虫荧光素酶在医学、生物学、航天学及工、农业等领域中有广泛的应用前景。由于虫荧光素酶来源有限,不稳定,且价格昂贵,所以,合理而经济地利用该酶,是一个重要的问题。虫荧光素酶的固定化,可使该酶得到反复、充分地使用.同时,亦可使该酶催化的生物发光分析技术简便化、自动化。七十年代来,国外就有人着手虫荧光素酶的固定化工作。迄今国内,尚未见有人从事这方面工作的报道。本文系统地比较了虫荧光素酶在本实验室现有的一些固定化载体上的固定情况,力求获得最佳的固定效果。同时,从不同的固定化方法获得不同固定化酶活的结果中,间接分析了虫荧光素酶的活性基团。