【棉铃虫单粒包埋型核型多角体病毒超氧化物歧化□HaSNPVsod基因的克隆与表达】.pdf

【棉铃虫单粒包埋型核型多角体病毒超氧化物歧化□HaSNPVsod基因的克隆与表达】.pdf

浙江大学硕士学位论文 学号:20016065 2HaSNPVC1sod基因在大肠杆菌里的表达(HaSNPV)C1株基因组中扩增sod基因编码区,克隆到pGEM-TEasyVector,测 定了核苷酸序列。将基因编码区克隆到原核表达载体pETBlhue2,构建了重组表达质 粒pETBlue2/HaSNPVSOD,转化大肠杆菌DE3(BL21)进行IPTG诱导表达.SDS-PAGE分析表明SOD的表达量约为细胞总蛋白的37。邻苯三酚法测定表达蛋 白活性,结果表明每毫克菌体可溶性总蛋白中表达产物校正酶活力单位为694U7 mg。浙江大学硕士学位论文 学号:20016065 镇江株的sod基因,以便鉴定该基因组中是否存在SOD,并在大肠杆菌中进行了表 达和活性测定(王文兵等,1999)。贡成良等2001年首次对美国白蛾核型多角体病毒(HcNPV)基因组中的sod基因进行研究,并在大肠杆菌中进行了表达和活性测定(贡成良等,2001)。目前,国内外对昆虫杆状病毒sod基因的研究仅此三种.本文利用基因工程的方法研究棉铃虫核型多角体病毒sod基因。为了进一步对 超氧化物歧化酶基因进行应用研究,对棉铃虫核型多角体病毒超氧化物歧化酶基因 进行了序列分析和比较,并分别在大肠杆菌和昆虫细胞中表达了超氧化物歧化酶基 因。浙江大学硕士学位论文 学号:20016065 看分子生物学技术不断成熟,对昆虫秆状病毒也悄然开展(Harrap,1972a.b.Harrapet al.,1977.SummersandSmith,1975a,b;ArifandBrown,1975)。八十年代初期,Smith 等首次重组了AcMNPV,成功在Sf9中表达人B-干扰素,成为第一个成功的例子(SmithGEetal,1983)。到二十世纪末,对昆虫病毒的研究发展迅速。截止到1990年,国际上报道过的昆虫病毒有1671株,我国为290株。90年代末期,昆虫病毒达1690 多株(洪华珠等,1997)。