【酵母发酵表达柞蚕抗菌□D的研究】段春.pdf

目录摘要前言一、抗菌肽的研究二、本论文实验的原理和路线材料方法结果一、pCLWA2+ABPG酵母穿梭质粒的鉴定二、酵母的转化及转化菌的筛选三、提取转化酵母细胞的质粒DNA进行鉴定四、转化酵母发酵上清液抑菌活性的检测五、对转化菌细胞进行紫外诱变六、酵母对抗菌肽D基因的表达曲线研究七、酵母发酵pH值控制对表达抗菌肽D的影响八、酵母发酵表达抗菌肽D时通气量的控制讨论一、酵母转化过程中感受态细胞的制备

摘要本论文对酵母发酵表达柞蚕抗菌肽D所做的研究进行了报道.实验运用完整酶母细胞的高效转化方法,将含有人工合成的椎蚕抗菌肽D基因的大肠杆菌一酵母穿梭质粒pCLWA2十ABPG转筛选出转化单菌落.针对质粒在酵母细胞中稳定性不高,拷贝数低而导致外源基因表达水平低的问题,用U.V.进行辐射诱变,选育出诱变株,其发酵上清液经处理后测得的抑菌圈直径较原转化菌提高20 .此外,对发酵条件所做的研究表明,发酵pH值的控制分为两个阶段最宜:前24小时将pH控制在5左右,后50小时将之保持在3。摇瓶发酵的通气条件最好是将摇床转速控制在325rpm。

间的转折区域由Ala一Gly一Pro组成,在所有抗菌肽中该序列均保守[3].目前的研究认为,正是由于抗菌肽的这一结构形式,使其能穿透细菌细胞膜使胞内物质逸出而导致细胞死亡5。而真核细胞由于具有完整的磷脂双分子层,阻碍抗菌肽对膜的穿透作用,并能在其受到损伤时很快修复。因此真核细胞可以避免受到抗菌肽的杀伤作用[14].就已有的研究结果表明,抗菌肽具有优越的杀菌作用。Okai等在研究柞蚕抗菌肽D对鼠造血细胞的生长,分化及功能的影响时,发现柞蚕抗菌肽D抑制植物血凝素诱导的鼠脾细胞DNA的合成,无显著细胞毒作用.