[利用噬菌体□库筛选胰凝乳蛋白□抑制剂的研究]张姝

【利用噬菌体□库筛选胰凝乳蛋白□抑制剂的研究】张姝.pdf吉林大学硕工论文 目录 提要 前言.第一部分:丝氨酸蛋白酶及其抑制剂。(一)丝氨酸蛋白酶天然抑制剂(二)丝氨酸蛋白酶短肽拍制剂的研制 第二部分:关于肽库(一)肽库技术的理论基础(二)噬菌体肽库的构建,(三)噬菌体肽库亲和性筛选过程(四)噬菌体肽库的应用 材料与方法 一、材料(一)肽库与菌种(二)试剂(三)结构计算的应用程序及软件(四)主要仪器(五)溶液.:0 二、方法(一)生物素化胰凝乳蛋三醇的制备与检测(二)取率的增及噬菌体离度的测定(三)取库的筛选,(四)噬菌体克隆抑制活性测定(五)单链DNA的提取及琼指糖凝胶电泳(六)DN提要 丝氨酸登白酶调控生物体内多种生理反应,具有重要的生 理功能、其短肽抑制剂的研制和开发是一个研究热点,具有重 要的临床应用价值。本论文以胰凝乳蛋白酶为模型.利用新兴 的噬菌体肽库技术,进行筛选蛋白酶抑制剂的研究 针对蛋白水解酶的特点和筛选抑制剂的目的性,将亲和筛 选和蛋白酶约水解活力相结合,改进了传统的亲和筛选方法,筛选富集到的噬菌体中,抑制性噬菌体克隆占80 ,高于以往 的亲和筛选,大大提高了对抑制剂筛选的有效性。通过序列分 析,六肽库筛选得到了保守性序列(S/T)RVPR(R/H),十五肽库 筛选发现了特征顺序(L/IV)S、L(R/H)、HS,为造一步的研 究提供了线索,根据筛得的吉林大学硕士论文 合环突出于骨架结构之外,并使敏感键附近残基的侧链也 指向骨架外侧(除了P3)。结合环构象由环上基团与骨架基 团间的相互作用而稳定.Canonicalinhibitors的作用机制如下[4):E-I=EI=E+I* kof 首先,酶与抑制剂快速形成稳定的复合物EI,而EI仅以 极慢的速度解离成游离酶及抑制剂I或P1-P肽键被切割的 抑制剂I*。通常,在生理pH条件下,水解平衡常数 Khyd=[I*]/[1]的值接近于 1,而当pH值提高或降低时,Khyd 则迅速增加。在EI复合物中,抑制剂主要以其结合环上的 氨基酸(约10个)侧链与酶的亚部位相互作用。
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