【利用噬菌体□库筛选胰凝乳蛋白□抑制剂的研究】张姝.pdf

吉林大学硕工论文目录提要前言.第一部分:丝氨酸蛋白酶及其抑制剂。(一)丝氨酸蛋白酶天然抑制剂(二)丝氨酸蛋白酶短肽拍制剂的研制第二部分:关于肽库(一)肽库技术的理论基础(二)噬菌体肽库的构建,(三)噬菌体肽库亲和性筛选过程(四)噬菌体肽库的应用材料与方法一、材料(一)肽库与菌种(二)试剂(三)结构计算的应用程序及软件(四)主要仪器(五)溶液.:0 二、方法(一)生物素化胰凝乳蛋三醇的制备与检测(二)取率的增及噬菌体离度的测定(三)取库的筛选,(四)噬菌体克隆抑制活性测定(五)单链DNA的提取及琼指糖凝胶电泳(六)DN

提要丝氨酸登白酶调控生物体内多种生理反应,具有重要的生理功能、其短肽抑制剂的研制和开发是一个研究热点,具有重要的临床应用价值。本论文以胰凝乳蛋白酶为模型.利用新兴的噬菌体肽库技术,进行筛选蛋白酶抑制剂的研究针对蛋白水解酶的特点和筛选抑制剂的目的性,将亲和筛选和蛋白酶约水解活力相结合,改进了传统的亲和筛选方法,筛选富集到的噬菌体中,抑制性噬菌体克隆占80 ,高于以往的亲和筛选,大大提高了对抑制剂筛选的有效性。通过序列分析,六肽库筛选得到了保守性序列(S/T)RVPR(R/H),十五肽库筛选发现了特征顺序(L/IV)S、L(R/H)、HS,为造一步的研究提供了线索,根据筛得的

吉林大学硕士论文合环突出于骨架结构之外,并使敏感键附近残基的侧链也指向骨架外侧(除了P3)。结合环构象由环上基团与骨架基团间的相互作用而稳定.Canonicalinhibitors的作用机制如下[4):E-I=EI=E+I* kof 首先,酶与抑制剂快速形成稳定的复合物EI,而EI仅以极慢的速度解离成游离酶及抑制剂I或P1-P肽键被切割的抑制剂I*。通常,在生理pH条件下,水解平衡常数 Khyd=[I*]/[1]的值接近于 1,而当pH值提高或降低时,Khyd 则迅速增加。在EI复合物中,抑制剂主要以其结合环上的氨基酸(约10个)侧链与酶的亚部位相互作用。