【体外缺血大鼠脑片纹状体等部位一氧化氮合成□阳性细胞时相变化及尼莫地平的保护作用】董铭.pdf

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缩写词 NO 一氧化氮 NOS 一氧化氮合成酶 NADPH-d 还原型尼克酰胺腺嘌呤 二核苷酸脱氢酶 min 分钟 EAA 兴奋性氨基酸 ROS 自由基 L-Arg 左旋精氨酸 NMDA N-甲基-D-门冬氨酸 ACSF 人工脑脊液 PBS 磷酸缓冲液 FAD 黄素腺嘌呤二核苷酸 FMA 黄素单核苷酸 SOD 超氧化物歧化酶摘要 近年来,有关一氧化氮(NitricOxide.NO)在缺血性脑损伤 中的神经毒作用已成为神经科学研究的热点。一氧化氮合成酶(NOS)是NO生物合成的关键酶。本实验利用无糖无氧人工脑脊液 本外模拟全脑缺血,用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)组织化学方法观察了大鼠脑片纹状体、皮层、海马中 NOS阳性细胞活性及数量的时相变化,探讨NOS阳性细胞与缺血 性损伤的关系、NOS阳性细胞自身的抗缺血损伤能力及尼莫地平 的脑保护作用.实验结果表明:在纹状体．体外缺血30min时,NOS阳性细胞 数目增加,Ca2+依赖性原生酶正在被大量激活,NO大量台成。体 外缺血60min时.NADPH-d就是一种一氧化氨合成酶(NOS)[8]。因此,简便而稳 定的NADPH-d反应可以作为确定NOS存在位置的标志,来显示生成 NO的神经细胞。介导神经损伤的NO来源于NOS阳性细胞,若没有 NOS阳性细胞产生NO,即使N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)受体 过度刺激和/或细胞内钙超载,也难以引起毒性损伤[6.NOS可分为两种类型:Ca²+依赖性原生酶和非Ca²+依赖性诱导 酶。NOS阳性细胞根据染色深浅可分为强、中、弱阳性三种类型:NOS强阳性细胞胞浆染成深蓝色,NOS弱阳性细胞着色很淡,中等 强度介于二者之间。染色的强弱与NOS活性有关,染色强则活性 也强。