【人白细胞介素-6与肿瘤坏死因子突变体融合蛋白的初步研究】刘丽.pdf

目录主要英文缩写词中文摘要.英文摘要文献回顾.研究论文前言第一部分人TNFacDNA的定位突变及其与天然TNF和1L-6 成熟肽编码区cDNA的序列分析人TNFa突变体及其与IL-6融合蛋白的设计思想实验材料实验方法实验结果.讨论.第二部分表达质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达研究.实验材料.实验方法.实验结果讨论第三部分重组体在大肠杆菌中表达产物的纯化及其生物学活性研究实验材料.实验方法实验结果讨论总结致谢参考文献.

摘要本文根据肿瘤坏死因子(TNF)结构与功能研究的最新信息及一一些肿瘤细胞上白细胞介素-6(IL-6)受体显著增高的事实,针对降低TNF的毒付作用,提高其生物学活性等目的,利用PCR技术,对人TNFa基因进行了改造。并通过DNA序列分析,确产物的序列进行了分析确证。构建了三种原核表达质粒,即:①表达5IL6-TNF.融合蛋白的pBVIL6-TNF.,②表达TNF突变体的pBVTNF.:③表达天然TNF的pBVTNF.使它们分别在大肠杆菌中进行了表达,并对影响其在大肠杆菌中表达效率的条件进行了优化。进而对它们在大肠杆菌中的表达产物进行了纯化。

文献回顾一、肿瘤坏死因子的研究进展 Carswe11等1975年发现:实验性诱生肿瘤的动物,注身卡介苗(HCG)后,、再注射内毒素(脂多糖,LPS),血清中可以产生一种与内毒素无关的活性因子,可以引起肿瘤出血坏死,称为肿瘤坏死因子(TumorNecrosisFactor,TNF)。它是一种由内毒素激活的巨噬细胞产生的对癌细胞有特异性杀伤作用而对正常细胞无细胞毒作用的非种属特异性活性因子。它不仅对多种肿瘤有细胞毒作用,而且参与机体炎症与免疫应答的调节,与休克、发热、多器官功能衰竭及恶病质等均有密切关系.1.TNF的产生及制备主要由活化的单核巨噬细胞产生的TNF,称TNFa.