【人内皮抑制素和人可溶性成纤维细胞生长因子受体1的表达及梅花鹿Sentrin全编码cDNA的发现】孙陆果.pdf
32录 成纤维细胞生长因子受体和可溶性成纤维细胞生长因子受体-10 sentrinSuMO调节细胞内重要功能的蛋白质修饰分子目 内皮抑制素一一种新的血管形成抑制因子 2.目的cDNA在DY150酵母细胞中的表达 3.目的cDNA在KM71酵母细胞中的表达 1.SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳分析重组蛋白(八)重组人内皮抑制素和人sFGFR1的活性检测 1.MTT掺入法NIH3T3成纤维细胞增殖实验 2.鸡胚尿囊膜(CAM)血管生成实验.
(DY150),CuSO诱导表达:收获裂解细胞,SDS-PAGE和Westem印 迹分析表达产物,结果均显示一约45KD的特异性蛋白条带,与预期 将人内皮抑制素cDNA次级克隆入分泌型表达载体pPICZaA中,转 化毕赤酵母(pichia)细胞(KM71),甲醇诱导表达:收获培养上清,SDS-PAGE分析表达产物,结果显示一约20KD的特异性蛋白条带,与预 将人内皮抑制素cDNA次级克隆入pFastBac1质粒中,转化已含病毒 载体和辅助质粒的DH10Bac大肠杆菌,使外源片段转座到昆虫细胞杆状 病毒载体(Bacmid)上:将重组Bacmid-EndoDNA导入昆虫细胞Sf9生 成重组杆状病