[孕妇外周血胎儿细胞的富集及在产前诊断中的应用]宋杰

【孕妇外周血胎儿细胞的富集及在产前诊断中的应用】宋杰.pdf谨以此文献给我尊敬的导师李守柔教授,感谢您对 我多年的培养和教诲,您那高尚的品德,渊博的学识,锲而不舍的敬业精神将成为我终生的楷模。摘 要 进入90年代,随着单克隆抗体技术、流式细胞技术、离心技术、聚合酶链反应及荧光原位杂交技术的日臻完善并 应用于临床。一种非侵入性产前诊断方法-从孕妇外周血富 集分离胎儿细胞进行基因诊断成为可能。据认为进入母血循 环的胎儿细胞类型有滋养细胞、淋巴细胞、及胎儿有核红细 胞三种,但其数量极其稀少,且在不同孕周及不同个体之间 存在许多差异。如何对上述细胞加以富集、分离并进行胎儿 产前诊断是目前产前诊断研究的一个热点。国外少数学者大 多利用各种胎儿细胞表面特异抗原的单克隆抗体经流式细胞 计数仪分离纯化胎儿细胞,但该方法价格昂贵、技术复杂,不适合临床一般实验条件下开展此项研究工作。杜绝男性患儿尤其是致死性遗传病患儿的出生。我们用所富 集的细胞提取DINA为模板,以男性特有的Y染色体长臂特异 DNA序列(DYZ1)149bp为扩增对象,经自行合成已知序列Y1 Y1引物介导PCR扩增后,其产物经琼脂糖凝胶电泳可见特 异的149bp阳性带。待胎儿出生后性别鉴定进行对照。在64 例孕妇中有33例男性婴儿,其中28例出现Y染色体特异DNA片 段,灵敏度为84 (28/33),假阴性5例,假阴性率15 (5/33)。另外31例分娩女性婴儿,除一例出现Y染色体特 异DNA片段外,其余未见特异带。故特异度为96 (30/31),假阳性率3.
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