【孕妇外周血胎儿细胞的富集及在产前诊断中的应用】宋杰.pdf

谨以此文献给我尊敬的导师李守柔教授,感谢您对我多年的培养和教诲,您那高尚的品德,渊博的学识,锲而不舍的敬业精神将成为我终生的楷模。

摘要进入90年代,随着单克隆抗体技术、流式细胞技术、离心技术、聚合酶链反应及荧光原位杂交技术的日臻完善并应用于临床。一种非侵入性产前诊断方法-从孕妇外周血富集分离胎儿细胞进行基因诊断成为可能。据认为进入母血循环的胎儿细胞类型有滋养细胞、淋巴细胞、及胎儿有核红细胞三种,但其数量极其稀少,且在不同孕周及不同个体之间存在许多差异。如何对上述细胞加以富集、分离并进行胎儿产前诊断是目前产前诊断研究的一个热点。国外少数学者大多利用各种胎儿细胞表面特异抗原的单克隆抗体经流式细胞计数仪分离纯化胎儿细胞,但该方法价格昂贵、技术复杂,不适合临床一般实验条件下开展此项研究工作。

杜绝男性患儿尤其是致死性遗传病患儿的出生。我们用所富集的细胞提取DINA为模板,以男性特有的Y染色体长臂特异 DNA序列(DYZ1)149bp为扩增对象,经自行合成已知序列Y1 Y1引物介导PCR扩增后,其产物经琼脂糖凝胶电泳可见特异的149bp阳性带。待胎儿出生后性别鉴定进行对照。在64 例孕妇中有33例男性婴儿,其中28例出现Y染色体特异DNA片段,灵敏度为84 (28/33),假阴性5例,假阴性率15 (5/33)。另外31例分娩女性婴儿,除一例出现Y染色体特异DNA片段外,其余未见特异带。故特异度为96 (30/31),假阳性率3.