【小鼠颌下腺神经生长因子的纯化鉴定及生物活性研究】王友联.pdf

目一.英文缩写二.摘要三.前言一四.材料与方法(一)主要试剂和主要仪器(二)实验方法 1.神经生长因子抗体的纯化 2.小鼠颌下腺神经生长因子粗提物的制备 3.亲和层析法提纯神经生长因子 -10 4.放射免疫法(RIA)测定神经生长因子含量 -10 5.神经生长因子的活性鉴定 6.神经生长因子分子量的测定五.实验结果 -14 六.讨论七.小结八.英文摘要九.参考文献十.

摘要神经生长因子(NerveGrowthFactorNGF)是一种对交感和感觉神经节细胞的生长、发育起重要作用的体液因子。本实验用标准NGF作为抗原免疫家兔制备抗NGF血清,用硫酸铵盐析法纯化 NGF抗体,并把NGF抗体偶联到澳化氰活化的Sepharose4B上制备亲和层析柱。以成年雄性小鼠的颌下腺为原料通过匀浆,离心等手段制备NGF粗提物,通过亲和层析的方法纯化了NGF。用放射免疫测定法(RIA)测定了NGF的含量。采用无血清的MEM培养基培养鸡胚背根神经节的方法鉴定NGF的生物学活性,并与鸡血浆法进行了比较。结果NGF的生物学活性是8000/m1。NGF在PH4.

价结合的碳水化合物,是具有精氨酸酯酶活性的丝氨酸蛋白酶10.a与亚单位两者基因间被5300个碱基隔开,α与亚单位只在活化丝氨酸蛋白酶所必需的多肽链上短少15个碱基。亚单位可将无活性的8亚单位转化为有活性的B亚单位。8亚单位是神经生长因子的活性区,是两个由118个氨基酸组成的单链通过非共价键结合而成的二聚体,每个6亚单位内有三组二硫键,是等电点为9的碱性蛋白质。1969年Bocchini用层析法从小鼠唾液腺中分离出的NGF分子盘为26000D,按其沉降系数称为2S神经生长因子t11。1973年Angeleti又测定了2.