[人IL-1βcDNA探针的制备及应用]鲍永利

【人IL-1βcDNA探针的制备及应用】鲍永利.pdf在三年的硕士研究生学习期间,我的导师杨贵贞 教授给予我悉心的指导、殷切的教诲,亲切的关怀.于永利教授给予我无私的帮助和鼓励以及技术上的指 导。在此,我愿向我的导师致以崇高的敬意和深深的 谢意。摘要 IL-1B具有广泛的生物学效应,是对机体的免疫调节方面具 有重要作用的细胞因子。本文在制备IL-1B探针的基础上进行了 初步应用的研究.一、IL-1BcDNA探针的制备 1、利用逆转录一PCR方法从U937细胞中钓取人IL-1BcDNA片 段.2、用平端连接的方法将IL-IBcDNA片段克隆至PGEM-4Z质粒 内,并转入JM109细菌中.3、用菌落原位杂交、酶切、PCR及Southern杂交方法进行重 组质粒的鉴定.4、切取IL-1BcDNA片段,用α82P-dCTP及生物素进行探 标记。用点杂交检测探针敏感度为1PB.二、IL-IBcDNA探针的应用 1.英文缩写词表 B-AP 碱性磷酸酶标记生物素 BCIP 5-溴-4-氯-3吲噪磷酸盐 bp 碱基对 BSA 牛血清白蛋白 cDNA 互补DNA CIAP 小牛肠源碱性磷酸酶 ddH2O 双蒸水 DEPC 焦碳酸二乙酯 dNTP.脱氧核苷三磷酸混合物 DTT 二硫苏糖醇 EB 溴代乙锭 EDTA 乙二胺四乙酸 GM-CSF 粒细胞单核细胞集落刺激因子 IFN 干扰素 IL 白细胞介素 IPTG 异丙基0-B-D-硫代半乳糖苷 Kb 千碱基对 NBS 新生牛血清 NBT 硝基蓝皿氨唑 NC 硝酸纤维素膜 PCR 聚合酶链反应 PHA 植物血凝素 -3-
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