【应用直接免疫萤光抗体技术快速诊断孢子丝菌病】李锺洙.pdf

在三年的研究学习期间,导师张民夫教授从各方面给予殷切的教诲和悉心的指导,在此谨向我尊敬的导师致以深深的谢意！

前言孢子丝菌病是由申克氏孢子丝菌引起的一种慢性深部真菌病。是由外伤而致感染,主要侵犯皮肤和皮下组织,偶而侵犯粘膜、肺、脑膜、骨骼、关节和其他内脏器官。皮肤型孢子丝菌病分为淋巴管炎型、固定型及播散型,由于其临床表现多样,有时可致误诊(23。孢子丝菌病的实验室诊断方法较多,包括直接镜检、真菌培养、组织病理检查、凝集试验、免疫扩散试验、补体结合试验、皮肤试验、酶标抗体技术及荧光抗体技术14-24、28)。荧光抗体技术做为一种免疫学和形态学相结合的技术,具有较高的灵敏性和特异性,并且有形态学特征。

效价为1:800,追加注射抗原4ml,于末次抗原注射后的第7天在无菌条件下免股动脉放血,分离免疫血清。以方阵滴定法测定效价,抗体价为1:2560(抗原浓度4×10*个／ml),符合用于标记荧光素的效价标准(33.2、抗体纯化、鉴定(30、32、341 饱和硫酸铵盐析法结合DEAE—纤维素层析法提取纯IgG.抗体鉴定①用紫外分光光度计测IgG含量。②用电泳法测球蛋白纯度,实验结果表明,免疫球蛋白和正常球蛋白均有很高的纯度,即二者均为纯IgG。(三)、荧光抗体的标记、精制、鉴定 1、标记(25] 采用低温袋内标记法,标记异硫氰酸荧光素。