【人钜细胞病毒地方株QDI基因文库的构建及基因组多态性分析】金成实.pdf

编写调摘要前言.材料和方法一、病毒和细胞.人胚脚细胞的制备 2.病毒培葬二、病毒DNA的提取和纯化.细胞内病毒DNA的提取 2.细胞外液病毒DNA的提取 3.病率DNA的纯化三、HCNVQDI株基因文库的构建 1.HCMVQDI株DNA限制性酶解 2.Puc18DNA的EcoRI酶解及性磷牌处理 3.连接 4.转化四、重组质粒的筛选 1.菌落原位杂交菌落转移.

摘要人巨细胞病毒(Human Cytome ga tovirus-HOMV)基因组 DNA 分子量为Xdalton(约 240Kb)。用 EcoR I 限制性水解产生个大小不等的片段。本文以PUC18 为载体,构建了HCMYQDI株基因文库,根据EcoRI插入灭活PUC18的β一半乳棚苷酶(LacZ)基因特性,在含IPTG和X-gal的平量上挑选无色重组菌,以[a一32P)标记的AD169株DNA为探针,采用原位杂交、斑点杂交及Southern印迹杂交等方法进一步证明插入片段为特异的 HCNIV DNA。

前言 HCNV在人群中感染极为常见,感染后多数无临床症状,但在某些情况下,如新生儿先天性需染、器官移植以及其它用免疫抑葡荆治疗引起免疫功能低下的慧者,感染 HCNV后可造成严重后果。艾滋病患者90 以上可伴随CMV感染,而且多数死于CMV 间质性肺炎。此外,HCNV还有致癌特性,与许多肿瘤的发生如宫颈癌[1]、前列藤癌、绪肠癌、Kaposi氏肉瘤[2]密切相关,HCMV是肿瘤发生机制的研究中不可忽略的因素.HCHV是疱疹病毒科中最大的病毒。病毒颗粒呈三维对称的二十面体,直径约200mm.病毒体由核心和衣壳两部分组成。衣壳由162个壳粒构成,衣壳外有一层糖蛋白被膜。