【应用国产试剂制备HBV-DNA探针条件的研究】王全师.pdf

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应用国严试剂制备HBV-DNA探针条件的研究 摘 要 为进一步促进和推广国严试剂在医学分子生物学研究中的应 用,普及核酸分子杂交技术更加深入有效地开疑对乙型肝炎病 毒(HBV)生物学特性诊断HBV感染和HBV感染的病理 后果及HBV引起肝癌作用机制的研究,本文使用法国Ga11b-ertF.将士提供的EcoRI切点,双倍串联HBV-DA(ayW亚型)与PBR,重组质粒P211和国严核酸工具酶、国严放射性核素标记和非标记单核梦政等国严试剂探讨了制备 HBVDNA探针的最佳标记条件。！采用普通工B培养基和国严恒温振荡器培养质粒P211转 化的大汤杆菌。氯霉系扩增质粒DNA.制HBV一DNA探针的影响.结果证明.比活度1554TB(4:C1)mMo1e的[H]dTTP标记1μg HBV-DNA,用 壹00C7.037MBg(1-1OuC1)之间与(H)HBV.DNA 探的比、i度县线性关系即(”H]aTTP用登增大i(H]HBV(1uC1)之片,既便增大{H)dTTP用业。 H)HBV-DA 探比活也不再增高。使用比活度111TB。(3000C1)m1e:ap]aATP,3B(100μC1)即可标记 出理想I[”P]HBV-DKA探计。前 分子杂交技术的建立和应用,推动了生物学和医学的发展 应用这一技术,加深我们对生命物质的认识,揭示了生物大分子 的发展,使人们能从分子水平上研究许多疾润的发病机制,在临 床医学中,应用分子杂交技术,建立了对某些代谢、遗传性疾病 分子生物学技术不仅是研究生命现象的主要手段,也是研究疾病 术是分于生物学中的基本方法应用分于杂交技术需要制备度 已知核酸的同源性,DNA探针已成为研究很多疾病发病机理和 诊断目的主要工具之一.乙型肝炎病(HBV)感染是影响人类健康和生存的重大 同题我国是世界上乙湿病毒性肝炎的主宴流行区之一,但在 HBV总染研究中?