【人甲状腺球蛋白单克隆抗体ELISA法的建立及临床应用】张晓慧.pdf
目录 摘 要.一2 言 3一4 一、主要实验材料、试剂和仪器 二、方法与步聚HTg提纯和鉴定口兔抗人Tg和羊抗人TgPcAb制备鼠抗人TgMcAb制备.-12 四 HTg一McAb一ELISA法建立.HTg一McAb一ELISA法临床应用 三、结 是 本法考核 14-17口本法与Tg抗体放免药盒对照试验 四、讨 论 18-25 五、结 论 六、参考文献 27-31 七、致 谢
摘 要 将人新鲜甲状腺组织切碎,用饱和硫酸铵沉淀法粗提三次,再 连续过两遍SephadexG一200凝胶层析柱,即高纯度的甲 状腺球蛋白(T名),用此抗原免疫家兔,获得高效价的兔抗人TB 多克隆抗体(PcAb),再用此抗原免疫BaLb/c小鼠,以细胞杂 交融合和克隆化技术得九珠分泌抗人T8单克隆抗体细胞珠,扩大 培养,注入小鼠腹腔收取腹水.测定所得单克隆抗体(McAb)滴 度和进行添加试验,从中选出三珠抗原决定簇不同,且强阳性的 McAb,用这三珠McAb建立了快速、敏感和特异的三位Tg一 McAb夹心ELISA法,本法的标准曲级是用TB标准品连续稀释 所得,线性在1.
具 言 Tg在通常情况下又可表现为12S的亚单位和27S的双体.Tg是甲状腺滤泡上皮细胞合成的,在碘化之前分泌至滤泡腔中,是胶质的主要成分,在正常情况下,当甲状腺上皮细胞受促甲状腺 激素(TSH)的刺激时,以饱饮方式摄入TB,Tg大部分被溶酶 体中的蛋白水解水解后生成三碘甲状腺原氨酸(T3)和四碘甲 状腺原氨酸(T4),并以扩散方式进入体液,作用于靶细胞。既 往认为Tg被封闭在甲状腺内,这个结论随着检测技术发展很快就 被否定。因外周血中可检测到Tg的存在(3一4),发现在正常生理 情况下有一小部分T名通过淋巴管进入血液循环,成为血中的正常 成分〔5一7)。被肝脏清除掉。