【粉纹夜蛾颗粒体病毒增效基因在大肠杆菌中的表达及其功能域初步分析】.pdf

CLONGANDEXPRESSIONOFTrichoplusianiGRANULOVIRUS ENHANCINGENEINEscherichiacoli,ANDPRELIMINARY ANALYSISOFITSFUNCTIONDOMAIN A Dissertation SubmittedasPartialFulfillmentoftheRequirementsfor theDegreeofDoctorwithMajorinEntomology in Zhejiang University Ph.

摘要通过插入外源毒素基因或修饰病毒自身基因构建高效工程病毒,以及通过异源重组获得颗粒体病毒中,纯化的增效蛋白可促进核型多角体病毒对幼虫和离体昆虫细胞的感染,其作用机理主要是降解围食膜和促进病毒粒子与细胞质膜的融合,但含增效蛋白的颗粒体病毒与核型多角体病毒混用时存在可能发生拮抗作用等诸多限制.有6个昆虫病毒增效蛋白的序列 901个氨基酸.然而目前已构建的含该增效基因的重组病毒毒力未明显改善.真核基因在原核细胞高效表达时,因不能正确折叠易形成水不溶性的包涵体晶体以及不能进行翻译后的糖基化修饰等常造成其活性部分或全部丧失.

迅速碱解P96,20min即有50 溶解,弱碱处理不导致其生物活性丧失.随P96浓度增加,其增效活性愈强,至6×100Bs/mL时趋于饱和mL大肠杆菌培养液表达的P96可有性有强烈抑制作用.P96通过破坏围食膜减少害虫取食量,使自然生境中的病原微生物得以顺利入侵,同时对棉铃虫幼虫生长发育具弱化作用:NaCO处理后的P96对棉铃虫2龄幼虫有显著致死效应(见第二次生物测定结果),也能导致初孵幼虫死亡,72h校正死亡率为14 .由于3龄幼虫自身修复能力和抵抗能力较强,经NaC0处理和未经处理的P96 都未能引起3龄幼虫的死亡,但其蛹重显著下降14.