【人细胞色素P4501A2cDNA2A6cDNA克隆及其在哺乳细胞中的表达】.pdf

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人细胞色素P4501A2cDNA,2A6cDNA 克隆及其在哺乳细胞中的表达 Cloning of Human Cytochrome p4501A2cDNA 2A6cDNA and Expression in mammalian cell 浙江大学湖滨校区生理学硕士研究生:严乐勤 PostgraduateforMasterDegreeinPhysiology:YanLeqin 导 师:余应年教授 Supervisor:Yu Yingnian 浙江大学 ZheJiangUniversity 一九九九年四月人细胞色素P4501A2cDNA,2A6cDNA 克隆及其在哺乳细胞中的表达 浙江大学湖滨校区生理学 95硕士研究生:严乐勤 导 师:余应年教授 摘 東要 细胞色素P450(CYP)是一组含血色素的超基因酶家族,它在许多外来物 包括药物、环境污染物、化学致癌物以及许多内源化合物的氧化代谢中都起 着关键作用。特异的细胞色素P450酶基因稳定转染入P450缺之的细胞,建 立转基因细胞系是确定单个P450酶在药物、毒物或致癌物的生物转化中的作用的强有力I具。鼠CHL细胞,用含400ug/m1G418的选择性培养基筛选出抗性克隆,扩大培 养成系,分别命名为CHL-1A2、CHL-2A6.酶活性测定(POD,COH):POD活性测定结果表明:CYP1A2cDNA表达的酶具有非那西丁去乙基作用.测定CHLS9和CHL-1A2S9的POD活性,反应30min,CHL-1A2S9比活性为296 ±59pmo1.mg*min,而CHLS9测不到POD活性.COH活性测定结果表明:CYP2A6cDNA所表达的酶具有香豆素-7-羟化作用.测定CHL-2A6S9和CHLS9的COH活性,反应30min,CHL-2A6S9比活性为2 ±0.