【转基因细胞系CHL-3A4的建立及其对黄曲霉毒素B1杂色霉菌素及环磷□胺的代谢活化作用】.pdf
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CYP3A4cDNA的克隆、酶切图谱和部分序列分析:根据已发表的人CYP3A4cDNA的序列设计5端(72bp)、3端(1775bp)两 个引物,并在两条引物中分别引入KpnI、Sa11酶切位点。以手术切除的人肝组 织总RNA为棋板,经逆转录一一聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增长为1704bp的CYP 3A4cDNA片段,直接重组于BlueScriptM13-T载体中并转化大肠杆菌JM109菌株,以蓝白筛选筛选出重组体,扩增重组质粒,通过KpnI、SalI、BamHI、HindIl 内切酶的酶切图谱分析重组体的限制性片段,与预计的相符合,而后以双脱氧末 端终止法以T3、T7为引物直接
keepactivatingofsomekindsofcarcinogensanddetectingthe genomichazardwithinthesamecell.CYP1,CYP2,CYP3arethreemajorCYPfamilieswhichcanactivate exogenouschemicals.CYP3A4isespeciallyimportantinCYP3 CYP3A5,CYP3A7)havebeenfounds0farinhuman,CYP3A3and CYP3A4mainlyexistinadultlivers,theothertwoinfetallivers,