【黑曲霉HD404酸性蛋白□的分离纯化及动力性质研究】.pdf

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目 摘要 ABSTRACT 前言 材料与方法.材料 一,菌珠 二,培养基 三,主要化学试剂及仪器 11.方法 一.酸性蛋白酶的分离和纯化“(一)酶液的发(二)酸性蛋白酶的提纯 1.硫酸铵沉淀分离 2.SephadexG-25脱盐.CM-SephadexC-80离子交换层析 4.SephadexG-75柱层析(三)蛋白质浓度的测定(四)酶活力的测定 1.酸性蛋白酶活力的测定 2.糖化酶活力的测定(五)电泳 X 1.摘要 酸性蛋白酶是由黑曲霉(Aspergillusniger)的诱变种HD404 分泌的胞外酶,发酵液经过滤、硫酸铵沉淀、SephadexG-25脱盐、CM-SephadexC-80离子交换层析及SephadexG-75凝胶过滤,获得 了完注纯的酸性蛋白酶,分子量为54000,等电点为3二0。分 别矿究了以酪蛋白、牛血清白蛋白、牛血红蛋白为底物时的动力学 注层:酪蛋白为最适底物,在pH2,40°C条件下,酶对酪蛋白、牛 血清白蛋白和牛血红蛋白的Km值分别为0 、0 和0 Vmcx分别为2075、1550和2793ugTyrmin-ml-。前言 蛋白酶是指能催化分解蛋白质肽键的一群酶的总称。North根据 蛋白酶的活性和功能团,把它们分为丝氨酸蛋白酶、羧基蛋白酶、疏基蛋白酶和金属蛋白酶「1)。丝氨酸蛋白酶为内肽酶,活性中心含 丝氨酸残基,最适pH中性左右.羧基蛋白酶也为内肽酶,活性中心 含羧基,最适pH偏低.硫醇蛋白酶活性中心含半胱氨酸残基.而金 属蛋白酶一般是乙n蛋白酶。除少数酶外,蛋白酶多为分子量低于 40000的单体酶,故较易进行动力学性质方面的研究.酸性蛋白酶是指最适反应pH在1-5的一类蛋白水解酶。在蛋白酶 中,这类酶的反应机制最为含糊不清(21,也没有简单的化学模式指 导。