【耐高温酿酒酵母HU-TY-1耐热机制及改建研究】.pdf

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耐高温酿酒酵母HU-TY-1耐热机制及改建研究 目录 摘要 前言 第一部分:HIU-TY-1耐热机制研究 材料与方法 一.菌株 二.培养基 三.试剂 四.酿酒酵母培养和热休克方法 五.酵母细胞存活率测定 六.电泳样品制备 七.聚丙烯酰胺垂直板状电泳 八.银胺染色法 结果 一.不同温度热休克效果 二.不同时间热休克效果 三.电泳结果 讨论 一.K氏酵母与HU-TY-1耐高温能力比较 二.K氏酵母、HU-TY-1的热休克应答 三.不同温度、时间对热休克效果的影响 四.电泳结果分析 第二部分:耐高温酿酒酵母HU-TY-1的改建 材料与方法一.菌种 二.摘要 热休克应答和热休克蛋白已成为研究细胞耐热性机理的一个重要领域。本文通过试验比较了耐高温酿酒酵母菌株IIU-TY-1和它的亲株K氏酵母的热休克应答效应.并应用SDS-聚丙烯酰胺 凝胶电泳的方法,比较HU-TY-1菌株与K氏酵母热休克前后的蛋 白质电泳图谱变化。分析表明.HIU-TY-1是因为能够组成型合成 一种Hsp70蛋白而获得了耐热性。另一方面.我们诱导HU-TY-1 菌株产孢.用显微操作法分离单孢,得到了4株单倍体菌株.并发现 其中1株单倍体具有较好的耐高温生长和发酵特性,并把这个单 倍体菌株与标准菌株W303-1B-1B杂交,诱导产孢后分离单孢.快速合成。热休克应答过程能使细胞耐受高温等环境压力的能 了IIsp。1Isp是一类分子量20～110KI)、序列1分保守的蛋白 质。目前认为它的功能是与调节细胞的耐热性有关,即Ilsp能够 保护细胞免受高温的伤害。IIsp作用机制1分复杂.涉及蛋白质 的折叠去折叠、跨膜运输、降解、蛋白质多聚复合物的装配等 合成调节到HIsp基因的定位都有很多报道!4-6l。关于酵母的热休 精确定位。加拿大CB公司正在培育能产生较高水平Hsp的酵母 菌株和其它菌株.能够耐受发酵过程中过热等不良条件。国内近 热休克应答的研究甚少。