【小牛胸腺末端脱氧核甘□转移□的提纯及其单克隆抗体的制备】.pdf

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小牛胸腺末端脱氧核苷转移酶的提纯 及其单克隆抗体的制备(摘要)浙江医科大学附属儿童医院 研究生:畅世隆 导师:郭淑芬徐淑芝 末端脱氧核苷酰转移酶(简称为TdT)是一种特殊的DNA 聚合酶,它不同于复制性DA聚合酶(α一、β一、一DNA 聚合和逆转录酶)。它不需要模板即能催化任一脱氧核苷三磷 在脱氧察聚或多聚核苷酸引物的3一0H端的聚合反应 在正常情况下,TdT仅存在于人、哺乳类动物和禽类骨髓和 胸腺的淋巴系干细胞和前T及前B淋巴细胞中,TdT的生物学功 能可能与免疫球蛋白重链和T细胞受体基因的重排有关,TdT的 表达也可见于某些造血系统恶性肿瘤,在除B细胞型外的急性淋巴 细胞白血病(AL饱和度,调pH为804C过夜。13000rpm离心20 分钟。沉淀溶于20m1含40mMKc1的10mM磷段钾级冲 液(pH72)中,透析13000rpm离心20分钟,得 上清汶(F4)。01igo(aT)一纤维素控(1。25×3cm)用含40mMKC1的磷政钾级冲液(pH7。2)平衡。F4上柱 平衡缓冲汶洗至0D280值为零用含1MKC1的上述缓冲液洗 脱。测各管的光密度值和TdT活性以及DNA聚合酶工活性。TdT 随着004～1MKC1盐梯度全部被洗脱下来,洗脱液中不含 DNA聚合醇I活性.已细胞白血病细胞株RPMI8402、Mo1t一4、CCRF一 CEM)均呈阳性反应与TdT阴性细胞株(B淋巴瘤细尼蛛 Raji、Daudi以及早幼粒细胞白血病细胞株H工60 红白血病细胞株K562,原始单核细胞白血病细胞标U937不反 应.与A⊥工(uALL2例、CA工工3例)呈不同程度的阳性 反应(阳性细胞数25.72),与AML(10例)均不反应 与进口抗TdT单抗的检测结泉完金一致。以上结果说明该三株单 抗均为抗TdT单抗且与人白血病细胞的TdT有良好的交叉反 应,鉴于本研究所制备的三株抗TaT单抗与进口的抗TdT单抗 的反应谱完全一致因此可望代替进口抗TdT单抗供国内临床 及有关的科