【科学技术成果报告乙型肝炎疫苗的制备及研究初报】科学技术文献.pdf

8)录目附件应用区带密度梯度超速离心法大量分离提纯血清HBsAg制备疫苗一、抗原提纯二、抗原纯度签定三、疫苗灭活条件四、疫苗抗原性的鉴定五、灭活疫苗的一般毒力鉴定乙型肝炎疫苗的预防接种研究疫苗皮内试验的免疫诊断分型及治疗乙型肝炎初步情况一、疫苗皮试诊断分型的初步观察二、疫苗治疗乙型肝炎初步情况疫苗制作及鉴定方法总结

电镜检查 PHA挂抗原免疫动物产生抗体免疫电泳对流电泳醋酸纤维薄膜电泳上清液弃去进行绝度鉴定定第一步硫酸铵沉淀及胃酶消化 HBsAg阳性血浆50毫升(滴度1:16以上)+50毫升生理盐水等量饱和(NH)SO在磁力搅拌器上边加边混匀,置冰箱过夜上清液弃去沉淀物加17升PBS溶解,装人透析袋内用生理盐水透析调pH至3士透析物加胃酶消化,(每10毫升加70毫克胃酶)37℃水浴4一5小时,每隔半小时轻摇一次上清液浓缩至10毫升左右图1 第二步凝胶柱分离(收集阳性标本,取其高峰部分作对流电泳)滴度约为1:16 图2 二抗原纯度鉴提纯的HBsAg经过以下

提纯之抗原,用0 甲醛灭活后图10提纯之抗原,用1 甲醛灭活后的的电镜图形电镜图形图8 6.电镜检查(参见图7、8、9、10):将收集下米的抗原,用不同浓度的甲醛灭活后,经5万转/分高速度离心2小时,用5万倍的放大照出的电镜图象,表明为均匀一致的小颗粒,无其它杂质,因浓度较大未作稀释,大部分小颗粒成堆集聚,仔细寻找,未发现有大颗这一结果表明,用健康谐毒者的血作为疫苗的来源较好,因为基本上没有大颗粒,传染三疫苗灭活条件病毒疫苗灭活条件一般均采用加温或甲醛灭活的办法。为保证疫苗无传染性保留抗原性,对甲醛的浓度选择了三种不同浓度,即以市购的甲醛作100 计算,加入0.